A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1. | The sheep industry for wool, milk and meat production is of increasing importance and new technologies for assessment of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that sperm membranes are composed by a phospholipid bilayer, and that lipid peroxidation is a major cause of cell damage, studieson the lipid components of semen are relevant. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen. Semen was collected with an artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged to separate the sample into two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods based on Folch, Less& Stanley method modified, using chloroform e methanol as solvents. After the extraction, some esterified fatty acids were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique in quantitative and qualitative aspects. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm under these experimental conditions was the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in Method 1.

Objetivou-se avaliar a flora microbiana no sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos, assim como a eficácia dos antibióticos estreptomicina, penicilina e gentamicina, na viabilidade de doses de sêmen congeladas. Foram utilizados 25 reprodutores de diferentes raças, submetidos a duas colheitas de sêmen através do método da vagina artificial, após higiene da região prepucial. A primeira colheita do sêmen foi realizada visando o exame microbiológico e a segunda teve como objetivo proceder a congelação, após diluição em leite desnatado, utilizando penicilina + estreptomicina (A1), gentamicina (A2) ou sem antibiótico (A3). Ao proceder a avaliação microscópica no sêmen fresco, evidenciou-se média de 87,92 ± 7,76% de motilidade individual progressiva (MIP) e 4,96 ± 0,20 de vigor espermático. Em relação à avaliação bacteriana, constatou-se principalmente bactérias do gênero Staphylococcus spp e Bacillus sp. Após a congelação do sêmen, não foram evidenciadas diferenças (P>;0,05) entre os grupos quanto a MIP e vigor espermático. Entretanto, na avaliação microbiológica pós-descongelação, a bactéria do gênero Staphylococcus spp esteve presente na maioria das amostras. Observou-se também que a gentamicina (13,3mg/mL) apresentou melhor atividade anti-microbiana no processo de congelação do sêmen, concluindo-se que pode ser o antibiótico usado na congelação do sêmen de reprodutores caprinos. | The aim of this research was to evaluate the microbial flora in the fresh and frozen semen of goat reproducers, as well as the effectiveness of the antibiotics estreptomicin, penicillin and gentamicin in cryopreservation of semen. It were used 25 males of different breeds, submitted to two semen collect through the artificial vagina method after cleanliness of prepucial region. The first collection of semen aimed the microbiological exam. The second collection had as goal accomplish freezing, after dilution in skimmed milk, with penicillin + estreptomicin (A1), gentamicin (A2) or control (A3). After microscopic evaluation, it was evidenced average of 87.92 ± 7.76% of MIP and 4.96 ± 0.20 of spermatic vigor in fresh semen. Regarding bacterin evaluation, it was verified, mostly, bacteria of the gender Sthaphylococcus spp and Bacillus sp. After semen cryopreservation, it was observed that there wasn't difference (P>;0.05) among groups in MIP and spermatic vigor. However, in the microbiological evaluation of frozen-thawed semen, bacteria of Sthaphylococcus spp gender was present in great part of samples. Gentamicin (13.3mg/mL) promoted larger inhibition of the bacterial growth in the semen post-freezing, concluding that gentamicin can be the antibiotic used for freezing of goat semen.

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apella), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p >; 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p >; 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo. | The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treat-ments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p >; 0.05) between coagulated fraction diluted ei-ther in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p; 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.

A seleção de galos para a reprodução pelo desenvolvimento da crista vem sendo empregada rotineiramente na avicultura, sendo necessários estudos para verificar a eficiência deste método de seleção. Este trabalho teve por objetivo comparar as características seminais de galos selecionados para a reprodução pelo desenvolvimento da crista. Foram utilizados 65 galos matrizes da linhagem AgRoss, selecionados na 20ª semana de idade e divididos em dois grupos: grupo A, animais sem crista desenvolvida (n=33), e grupo B, animais com crista desenvolvida (n=32). Foram realizadas colheitas semanais de sêmen dos galos de 24 a 71 semanas de idade, para avaliar as características seminais. Foram realizados os testes t de Student e de Wilcoxon para comparar os grupos e análises de perfis para verificar efeitos do grupo, idade e interação grupo x idade. Os valores de volume seminal, concentração espermática, motilidade e vigor foram maiores (p < 0,01) para o grupo B no período de 24-31 semanas de idade. A percentagem de defeitos espermáticos para o grupo A foi maior nos períodos de 24-27 (p < 0,01) e de 32-35 semanas de idade (p < 0,05). O peso corporal foi maior (p < 0,05) para os animais do grupo B no período entre 24-39 semanas de idade e para os galos do grupo A no período de 60-71 semanas de idade. Foram observados efeitos da idade e interação grupo x idade para as características seminais, exceto para vigor. Em conclusão, a observação do desenvolvimento da crista na 20ª semana de idade é um método eficiente na seleção de galos para a reprodução. | The selection of cocks for reproduction by comb development has been employed usually in the aviculture; however, studies have been necessary to establish the efficiency of this method of selection. The objective of this paper was to compare the seminal characteristics in cocks selected to reproduction by comb development. Sixty-five broiler breeder males (AgRoss strain) were selected to breed at 20th week old and divided in two groups, A: birds without comb (n=33) and B: birds with comb (n=32). To evaluate seminal characteristics, semen was collected weekly between 24 to 71 weeks of age. Group means were compared by the Student's t and Wilcoxon tests while profile analysis were performed for to verify effects of group, age, and group x age. Seminal volume, sperm concentration, motility and vigor were greater (p < 0.01) for group B from 24-31 weeks of age. Percentage of sperm morphological defects was greater in group A during 24-27 (p < 0.01) and 32-35 (p < 0.05) weeks of age. Mean body weight was higher for group B between 24-39 weeks of age (p < 0.05) and for group A between 60-71 weeks of age. There were no main effects of group for seminal characteristics or body weight (p >; 0.05), but effects of age (p < 0.001) and group x age interaction were significant (p < 0.05), except for vigor (p >; 0.05). Low or no correlations were observed between seminal characteristics and body weight. In conclusion, the method to select cocks by observation of comb development at 20 weeks of age showed efficient.

The use of frozen semen has become increasingly popular in canine artificial insemination, stimulating research to improve freezing methods and extenders. In this study, was compared the final concentration of 5% ethylene glycol used in 3 equilibration protocols. In Method I, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and frozen without cooling. In Method II, one part of semen was added to two parts of tris-fructose-citric acid with 7.5% ethylene glycol (Extender 2) and cooled at 5ºC for 1 hour before freezing. In Method III, one part of semen was added to one part of tris-fructose-citric without ethylene glycol (Extender 1) and cooled at 5ºC for 1 hour. Just after this period, one part of 5ºC cooled tris-fructose-citric acid containing 15% ethylene glycol (Extender 3) was added to the previous extended semen, maintained at 5ºC for one additional hour and frozen. For freezing in each procedure semen was packaged in 0.5 ml plastic straws and placed for 20 minutes in vapor 5 cm above liquid nitrogen and then lowered into the liquid nitrogen and stored. All samples were thawed by immersion for 30 sec in a 37ºC water bath and immediately evaluated. Progressive motility was best after Method III (63%), which was not different from fresh semen (94%) but was better (p< 0.05) than after Method II (25%) or Method I (6%). Forward velocity was again best after Method III (2.9) comparable to fresh semen (4.6) and Method II (2.5), but better (p< 0.05) than Method I (1.7). Morphological abnormalities were lowest after Method III, but were not significantly different from Methods II or I. Most common abnormalities were detached heads and bent, hairpin and coiled tails. It was concluded that slow, step-wise equilibration in tris-fructose-citrate extender followed by extender with ethylene glycol before freezing seems to produce the best progressive motility and forward velocity in frozen-thawed canine spermatozoa. | A utilização de sêmen congelado tornou-se extremamente comum na prática da inseminação artificial em cães, estimulando a pesquisa de métodos de congelação e diluidores. Neste estudo foram avaliadas as propriedades criopreservativas do etileno glicol na concentração final de 5%, utilizado em 3 diferentes protocolos de congelação. No Método I, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico, contendo 7,5% de etileno glicol e congelado sem prévia refrigeração. No Método II, uma parte de sêmen foi adicionada a duas partes de tris-frutose-ácido cítrico contendo 7,5% de etileno glicol e resfrigerado até 5ºC por 1 hora antes da congelação. No Método III, uma parte de sêmen foi adicionada a uma parte de tris-frutose-ácido cítrico sem etileno glicol e refrigerado até 5ºC por 1 hora, sendo em seguida adicionada uma parte de tris-frutose-ácido cítrico, previamente refrigerado até 5ºC, contendo 15% de etileno glicol, mantido a 5ºC por mais 1 hora e congelado. Para a congelação em cada método, o sêmen foi envasado em palhetas plásticas de 0,5 ml, colocadas em vapor de nitrogênio a 5 cm da coluna líquida por 20 minutos, mergulhadas no nitrogênio líquido e armazenadas. Todas as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos e imediatamente avaliadas. O Método III não apresentou decréscimo significante da motilidade retilínea progressiva após a descongelação e apresentou os melhores resultados para o vigor espermático, comparando-se aos demais métodos. Entretanto, os 3 métodos não apresentaram diferença significativa com relação aos defeitos espermáticos pós-descongelação. Os tipos de defeitos mais freqüentemente encontrados foram cabeça solta normal, cauda dobrada, fortemente dobrada e fortemente enrolada. Foi possível concluir que o tempo de equilíbrio maior no diluidor tris-frutose-ácido cítrico seguido pela diluição em etileno glicol antes da congelação parece produzir para os espermatozóides de cães a melhor motilidade retilínea progressiva e vigor após a descongelação.

Aiming to evaluate frozen goat semen in TRIS diluent with low egg yolk addition, progressive motility was evaluated soon after freezing and again 4 years later, resulting in 38.2 ± 7.4% and 31.4 ± 13.5%, respectively. Sixteen goats were oestrus synchronized through progesterone impregnated intravaginal sponges followed by PMSG injection on day 9. Vaginal sponges were withdrawn on day 11, with goats being artificially inseminated 46 hours later with semen frozen in straws and stocked during 4 years in liquid nitrogen. The nonreturn rate attained 31.2%. TRIS diluent with low egg yolk addition was considered as efficient in relation to frozen sperm evaluated both in vitro through progressive motility as in vivo through artificial insemination. | Com o objetivo de avaliar o sêmen de caprinos congelado em diluidor à base de TRIS contendo baixa quantidade de gema de ovo, foi feita a análise da motilidade retilínea e progressiva logo após o congelamento e após 4 anos de estocagem em nitrogênio líquido, resultando respectivamente em 38,2 ± 7,47% e 31,43 ± 13,55%. Foi feita a sincronização do cio de 16 cabras com esponjas intravaginais impregnadas com progesterona e aplicações de PMSG no nono dia. No 11º dia as esponjas foram retiradas e após 46 horas foi feita a inseminação artificial com palhetas estocadas por 4 anos. Houve 31,2% de não-retorno ao cio. O diluidor à base de TRIS contendo baixa quantidade de gema de ovo se mostrou eficiente quanto à preservação dos espermatozóides quando avaliados in vitro através da motilidade retilínea e progressiva e in vivo através da inseminação artificial.

<p>Sperm analysis and testicular histological studies were performed before and after vincristine sulphate treatment, in fourteen male dogs. In group I (n = 8), unilateral orchiectomy was carried out before and after mitostatic treatment, and testicular and epididymal biopsies were examined histologically. All histological examinations showed a slight to moderate degeneration of testicular tissue. In group II (n = 6) semen was collected and was submitted to laboratorial analysis. After vincristine treatment, middle piece and tail abnormalities were found. However, as physical and morphological abnormalities showed to be reversible, vincristine sulphate therapy may be used in such species.</p> | <p>Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo de analisar, laboratorialmente, o sêmen e os aspectos histológicos dos testículos antes e após a administração do sulfato de vincristina. Para tanto, os animais foram divididos em 2 grupos. No grupo I (8 animais), submeteu-se os animais à orquiectomia unilateral e um fragmento do testículo e epidídimo foram analisados histologicamente. Ao término das aplicações, os animais sofreram a orquiectomia do testículo remanescente e foram avaliados histologicamente. No grupo II (6 animais), inicialmente, condicionou-se os animais para colheita de sêmen. Após obtenção do material fecundante, este foi analisado laboratorialmente. No grupo I, todos os animais apresentaram degeneração testicular em grau leve ou moderada. No grupo II, observaram-se alterações espermáticas, principalmente ao nível de peça intermediária e cauda. Entretanto, considerando que em termos de média, as características físicas e morfológicas do sêmen de cães sofreram alterações que são reversíveis à utilização do sulfato de vincristina, como recurso terapêutico, pode ser instituído nesta espécie animal.</p>

Semen was collected by masturbation from 25 German Shepherd dogs, 1 to 7 years old and weight from 30 to 35 kg. Aiming to utilize the semen for artificial insemination, only the second and partial third fractions were used. Results were as follows: mean ejaculation volume 7.17 ml; white colour and milky aspect: sperm motility 68.84%; vigour 3.5; concentration 136.192 spermatozoa/mm³ and 889.772.000 spermatozoa by ejaculation: 9.92% of major defects, 7.62% of minor defects and still an individual abnormalities classification. The pH of semen, of extenders and of extended semen, respectively, varied from 6.02 to 6.60; 5.85 to 6.90 and 5.97 to 6.76: osmotic pressure of 285.20 to 295.00; 240.00 to 310.00 and 272.32 to 303.92 mOlm and sodium and potassium concentrations, respectively, to seminal plasma and 4 extenders, 134.40 to 156.00 and 7.80 to 13.72 and 3.00 to 270.00 and 6.00 to 25.00 mEq/l. There was significant variation among dogs, in all seminal characteristics, except for osmotic pressure. There was also correlation between the seminal characteristics and between these and total sperm abnormalities. Variability of seminal characteristics among dogs is greater when comparing collections of each animal, with exception of osmotic pressure and sodium concentration variability that is reversed. | Sêmen de 25 cães da raça Pastor Alemão, com 1 a 7 anos de idade e pesando 30 a 35 quilos, foi coletado por masturbação. Com o objetivo de utilizar o material para inseminação artificial, colheu-se a segunda e parte da terceira fração, constatando-se, em média, volume de 7,17 ml; cor branca e aspecto leitoso; motilidade de 68,84%; vigor de 3,5; concentração de 136.192 espermatozóides por mm³ e de 889.772.000 por ejaculado; defeitos espermáticos maiores de 9,92% e menores de 7,62%. O pH do sêmen, dos diluidores e do sêmen diluído variou, respectivamente, de 6,02 a 6,60; 5,85 a 6,90; e 5,97 a 6,76; a pressão osmótica de 285,20 a 295,00; 240,00 a 310,00; e 272,32 a 303,92 mOsmois e a concentração de sódio e potássio, respectivamente, para o plasma seminal e os 4 diluidores, de 134,40 a 156,00; 7,80 a 13,72; 3,00 a 270,00; e 6,00 a 25,00 mEq/l. Verificou-se que entre cães, houve variação significante de todas as características seminais, exceto a pressão osmótica e, ainda, correlações entre os caracteres seminais e entre estes e os totais de patologias espermáticas. A variabilidade das características seminais entre os cães foi bem maior quando comparada entre as colheitas de cada animal, exceto a pressão osmótica e a concentração de sódio, que se apresentaram de maneira inversa.

<p>Semen collection in Chinchilla was attained through electroejaculation with an electrode inserted 3cm deep in the rectum, utilizing a series of 9 shocks of 12.5 mA, 6 shocks of 25.0 mA and 19 shocks of 50.0 mA. Material obtained was considered of good quality, both for freezing and thawing.</p> | <p>O método da eletroejaculação foi utilizado em chinchila através de eletrodo introduzido a 3 cm no reto do animal, obtendo-se os melhores resultados com uma série de 9 choques de 12,5 mA, 6 choques de 25,0 mA e 19 choques de 50,0 mA. O sêmen obtido nestas condições foi considerado de boa qualidade, comportando-se satisfatoriamente tanto no processo de congelamento, quanto no descongelamento.</p>

Twelve adult Santa Inês crossbred rams with similar weight and age employed in a randomized design for 60 days period to evaluate three treatments: A. 100% of degradable protein requirement (control); B. 100% of degradable protein requirement + 3% urea + inorganic sulphur (99%S) and C. 100% of degradable protein requirement +3% urea + organic sulphur (21,5% S). Every week seminal collections were made through artificial vagina; blood collections were made to analyze plasma N-ureic levels and measured live weight and scrotal circumference. In semen samples were studied volume, microscopic waves, vigor, motility, concentration, total sperm per ejaculate, total feasible sperm per ejaculate, membrane sperm integrity, acrosomal integrity, percent of abnormal spermatozoa and N-ureic level in seminal plasma. Treatments experimental animals receiving presented blood and seminal plasma N-ureic levels higher than the ones of control treatment (p &lt; 0,05). There was significant difference between organic and inorganic sources of sulphur in the following semen characteristics (p &lt; 0,05): treatment C presented microscopic waves (4,57), motility (85,69%), vigor (4,66) and total sperm per ejaculate (9,02 x 10(9)) higher than treatment B; and the percentage of secondary sperm abnormality (5,37%) was lower than treatment B. | Doze carneiros machos adultos mestiços Santa Inês de mesma idade e porte semelhante foram empregados em um delineamento inteiramente casualizado, por um período experimental de 60 dias. Os animais foram distribuídos para três tratamentos: A. 100% das exigências em proteína degradável no rúmen (controle); B. 100% das exigências em proteína degradável no rúmen + 3% de uréia + enxofre (99% S) e C. 100% das exigências em proteína degradável no rúmen + 3% de uréia + enxofre quelatado (21,5% S). Semanalmente foram colhidas amostras de sêmen obtidas com emprego de vagina artificial e de sangue para determinação da concentração de nitrogênio uréico plasmático, assim como realizadas pesagens dos animais e aferições de circunferência escrotal. No sêmen foram analisados: volume e turbilhonamento; vigor, motilidade e concentração espermática; total de espermatozóides e total de espermatozóides viáveis no ejaculado; integridade de membrana e de acrossoma; morfologia espermática e concentração de nitrogênio uréico no plasma seminal. Os animais suplementados com uréia apresentaram níveis de N-uréico no plasma sanguíneo e seminal significativamente maiores que os encontrados nos do tratamentos controle (p&lt;0,05). Houve diferença significativa entre as fontes de enxofre utilizadas (p&lt;0,05) quanto às características do sêmen estudadas, o tratamento C apresentando valores maiores para turbilhonamento (4,57), motilidade espermática (85,69%), vigor espermático (4,66) e total de espermatozóides por ejaculado (9,02 x 10(9)), além de uma porcentagem inferior de defeitos menores (5,37%) quando comparado ao tratamento B.