Detection of tet(M) gene from raw milk by rapid DNA extraction followed by a two step PCR with nested primers [tetracycline resistance; Polymerase Chain Reaction]
2004
Codega Oliveira, A. De | Bartocci, E. | Ortenzi, R. | Vizzani, A. | Cenci Goga, B.T.
Английский. A rapid method based on a modification of a sodium iodide DNA extraction, followed by a two-step PCR, was developed for direct detection of tet(M) gene in milk samples. This study compares the proposed method with a traditional phenol solvent extraction method and with a commercial kit. The three DNA extraction methods were used to ensure access to the tet(M) gene from 1 ml of raw milk, inoculated with a strain of Enterococcus faecalis which carries the tet(M) gene. The proposed method, followed by a two-step PCR with nested primers specific for the tet(M) gene, was able to reach a detection limit below 10 CFU/ml in less than 5 h, including the two amplification cycles, thus outperforming in sensitivity and rapidity both the traditional and the commercial method
Показать больше [+] Меньше [-]итальянский. [E' stato sviluppato un metodo rapido basato su una modifica dell'estrazione del DNA con ioduro di sodio, seguita da una two-step PCR, per la ricerca diretta del gene tet(M) in campioni di latte. Questo studio aveva lo scopo di confrontare il metodo proposto con un metodo tradizionale di estrazione con fenolo e con un kit commerciale. I tre metodi di estrazione del DNA sono stati utilizzati per la ricerca diretta del gene tet(M) da 1 ml di latte crudo, inoculato con un ceppo di Enterococcus faecalis che porta il gene tet(M). Il metodo proposto, seguito da two-step PCR con nested primer specifici per il gene tet(M), è stato in grado di raggiungere un limite di rilevabilità al di sotto di 10 UFC/ml in meno di 5 h, compresi i due cicli di amplificazione, superando quindi in sensibilità e rapidità sia il metodo tradizionale, sia quello commerciale.]
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