Deposição de colagénio na placenta equina : possível relação com a idade da égua e peso do poldro

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária

Em égua idosas, o aumento das fibras de colagénio no endométrio predispõe à sub-fertilidade e infertilidade. Visto que, quando o colagénio está presente no endométrio equino também está no oviduto, propôs-se a hipótese de também poder existir na placenta e, desta forma, contribuir para uma diminuição do peso do poldro à nascença. Como tal, o objetivo principal deste estudo foi avaliar (quantitativamente e qualitativamente) a presença de fibras de colagénio na placenta equina e a sua relação com o aumento da idade da égua e com o peso do poldro. A placenta foi pesada imediatamente após a sua expulsão e o poldro foi pesado às 24h pós-nascimento. Foram recolhidas amostras do corno grávido, do corno não-grávido e do corpo da placenta de éguas mais novas com idades inferiores a 10 anos (Novas; n=7), e de éguas mais velhas, com idades entre os 10 e os 15 anos (Idosas; n=9), de diferentes raças. Os tecidos foram colocados em formaldeído a 4 % (para estudos histológicos) e em RNA Later (para determinação de transcrição e da proteína). A presença de colagénio na placenta foi avaliada através da quantificação de transcritos de COL1A1, COL1A2, COL3A1 e COL5A1 por PCR em tempo real, e de proteína total, indiretamente, através da concentração de hidroxiprolina. Além disso, foi realizada uma avaliação qualitativa histológica do colagénio dos tipos I e III em cortes de placenta corados com Picrosirius Red e observados ao microscópio ótico sob um feixe de luz polarizada. Foi também realizada a medição da espessura do tecido conjuntivo da placa corial no corno grávido da placenta equina. Os dados foram analisados por ANOVA a um fator seguido dos respetivos testes post-hoc ou pelo teste de correlação de Pearson (GraphPad Prism e Statistica 7). Houve um aumento dos níveis de mRNA de COL1A1, COL3A1 e COL5A1 e de hidroxiprolina no corno grávido de éguas idosas (≥ 10 anos; p<0,05). Além disso, a espessura do tecido conjuntivo da placa corial no corno grávido da placenta equina foi maior em éguas idosas quando comparada com éguas novas (p<0,05). Foi observada uma correlação positiva entre o peso do poldro e o peso da placenta (R = 0,7284; p=0,001), assim como, entre o peso do poldro e a idade da égua (R= 0,6596; p=0,005). Apesar de não ter sido encontrada uma correlação entre o colagénio total presente na placenta e a idade da égua ou o peso do poldro, a fibrose, que é caraterizada pelo aumento da deposição de fibras de colagénio, foi maior no corno grávido de placentas de éguas idosas, o que tem sido considerado um sinal de insuficiência placentária noutras espécies, com repercussões negativas no peso do recém-nascido.

ABSTRACT - Collagen deposition in equine placenta: possible connection with mare’s age and foal’s weight - In older mares, increasing collagen fibers in the endometrium predisposes to sub-fertility and infertility. Since when collagen is present in the mare endometrium it also is in the oviduct, we hypothesized that it could also exist in the placenta, and therefore contribute for a lower weight of the newborn foal. Thus, the main objective of this study was to evaluate (quantitatively and qualitatively) the presence of collagen fibres in mare’s placenta with ageing and its putative relationship with neonate birth weight. The placenta was weighed immediately after its expulsion and the foal was weighed 24h post-partum. Tissue samples were collected from the gravid horn, non-gravid horn and body of the placenta from younger mares, under 10 years of age (Young; n=7), and from older mares, between 10 and 15 years old (Aged; n=9), of different breeds. They were placed in 4% formaldehyde (for histological studies) and in RNA Later (for determination of transcripts and protein). The presence of collagen in the placenta was determined by the quantification of transcripts of COL1A1, COL1A2, COL3A1 and COL5A1 by real-time PCR, and of total collagen protein, indirectly assessed based on hydroxyproline concentration. In addition, a qualitative histological evaluation of collagen type I and III was performed in placenta sections stained with Picrosirius Red and observed under light microscope, under a polarized light beam. The thickness of the chorionic plate connective tissue of the equine placenta pregnant horn was also evaluated. Data were analysed by one-way ANOVA followed by the respective post-hoc tests or by Pearson´s correlation test (GraphPad Prism and Statistica 7). There was an increase in mRNA levels of COL1A1, COL3A1 and COL5A1 and of hydroxyproline in the pregnant horn of old mares (≥ 10 years; p<0.05). In addition, the connective tissue thickness of the chorionic plate in the equine placenta pregnant horn was bigger in old mares when compared to young mares (p<0.05). A positive correlation was observed between foal’s weight and placenta’s weight (R = 0.7284; p=0.001), as well as, between foal´s weight and the age of the mare (R= 0.6596; p=0.005). Although no correlation was found between the total collagen present in the placenta and the age of the mare, nor the weight of the foal, fibrosis, which is characterized by increased collagen fibre deposition, was higher in the pregnant horn of old mares’ placentas. This has been considered as a sign of placental insufficiency in other species, with a putative negative outcome in the weight of the neonate.

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