O objetivo deste trabalho foi estudar a remoção do crioprotetor, em duas ou três etapas, em embriões bovinos produzidos in vitro após a congelação em vapor de Nirtogênio. Blastocistos expandidos (1329) foram mantidos em co-cultivo (controle) ou criopreservados em 3 protocolos de congelação em vapor de nitrogênio. Os embriões foram equilibrados na solução de 10% de EG por 10 minutos e em 17%, 22% ou 28% de EG por 30 segundos. Após o envase, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio por 2 minutos e armazenadas em nitrogênio líquido. Após a descongelação, os crioprotetores foram diluídos em duas etapas, usando 0,3M de sacarose e solução isotônica ou em três etapas usando 0,3M de sacarose + 10% de EG; 0,3M de sacarose e solução isotônica. Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa, avaliando as taxas de re-expansão após 24 horas e de eclosão após 24, 48, 72 e 96 horas. Para os grupos congelados no vapor e diluição do crioprotetor em duas etapas, as taxas de eclosão foram de 1,94; 11,88 e 6,06% para EG17, EG22 e EG28, respectivamente. Já para os grupos com diluição do crioprotetor em três etapas, as taxas de eclosão foram de 4,67; 9,90 e 10,78% para EG17, EG22 e EG28, respectivamente.

O objetivo deste estudo foi avaliar folículos pré-antrais (FOPA) ovinos isolados após sua exposição e criopreservação utilizando glicerol (GLI), etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) a 1,5 e 3,0 M. Cada par ovariano de 5 ovelhas sem raça definida foi coletado em abatedouro local e submetido ao isolamento folicular. Da suspensão obtida, uma alíquota foi imediatamente destinada à análise da viabilidade folicular com o auxílio do corante vital azul de trypan. O restante da suspensão foi dividida em 16 alíquotas de 0,9 mL, suspensas (v/v) em MEM+ com EG, DMSO, GLI ou PROH a 1,5 ou 3,0 M, para teste de toxicidade e criopreservação. Após o término de cada tratamento, a viabilidade folicular foi analisada e os FOPA considerados viáveis se não corados ou não viáveis, quando corados. A análise dos dados mostrou que após o teste de toxicidade e criopreservação, em todos os crioprotetores e em ambas as concentrações, a percentagem de FOPA viáveis foi significativamente reduzida quando comparada ao controle. No teste de toxicidade, quando os crioprotetores foram comparados entre si nas mesmas concentrações, foram observadas percentagens significativamente menores de FOPA viáveis no PROH 3,0 M (38,9%), apresentando-se, portanto, mais tóxico quando comparado aos demais crioprotetores. Após criopreservação, obteve-se percentagens significativamente maiores de folículos pré-antrais viáveis quando o EG e o DMSO foram utilizados. Em conclusão, FOPA ovinos isolados podem ser criopreservados com sucesso utilizando-se DMSO e EG a 1,5 e 3,0 M.

To verify the effect of three different extenders and two thawing temperatures on frozen-thawed canine sperm characteristics, one ejaculate from nine dogs were separately collected and processed (n=9). Each ejaculate was divided into 3 equal samples and centrifuged. The pellets were re-suspended using: 1st pellet - Glicyne-egg yolk extender (GEY), 2nd pellet - TRIS extender and 3rd pellet - M9 extender and all samples were filled in 0.5ml straws. A total of 84 straws (28 for each protocol) were done. The sperm motility, vigour and plasma membrane integrity from each protocol were immediately evaluated (M1) and the straws were brought to a refrigerator at 5ºC for 60 minutes. After that, a sample from each protocol was warmed up in a water bath 37ºC for 5 min. and sperm motility, vigour and plasma membrane integrity were evaluated (M2). The straws were frozen in liquid nitrogen. One straw from each protocol was thawed at 37ºC for 30 sec and another at 72ºC for 8 sec and the sperm motility; vigour, CASA and plasmatic membrane integrity and acrossomal status using FITC-PNA stain were evaluated (M3). Plasma membrane, sperm motility and vigour were evaluated after a 1-hour incubation at 37ºC (M4). Statistical analysis showed that the higher temperature had positive effect on froze-thawed canine sperm characteristics. The best results were taken when canine semen was frozen in GEY extender and thawed 72ºC for 8 sec. | Com objetivo de avaliar o efeito de dois protocolos de descongelação do sêmen canino congelado em três diluidores foram coletados ejaculados de nove cães. Cada ejaculado foi dividido em 3 amostras, centrifugado e os pellets tratados sob diferentes protocolos: 1º - meio á base de glicina e gema de ovo; 2º - meio á base de TRIS e 3º - meio M9. Foram envasadas 28 palhetas de 0,5ml segundo cada protocolo. Amostras tratadas sob cada protocolo foram avaliadas (M1) quanto a motilidade, vigor e integridade das membranas. As palhetas foram refrigeradas a 5ºC por 60 min. e congeladas em N2. Uma amostra de cada protocolo foi avaliada quanto: motilidade, vigor e integridade das membranas após o equilíbrio (M2). Eram sempre descongeladas três pares de palhetas, sendo que cada par havia sido congelado sob um mesmo protocolo. Uma das palhetas de cada par era descongelada a 37ºC por 30 segundos e outra a 72ºC por 8 segundos. Cada grupo foi avaliado após o descongelamento (M3) quanto a motilidade e vigor espermático, avaliação computadorizada do movimento, integridade das membranas e avaliação acrossomal por meio de Fitc-PNA e PI. As amostras foram mantidas em banho Maria a 37ºC por 1h para o teste de longevidade espermática e reavaliadas (M4) quanto à motilidade e vigor espermáticos, integridade das membranas. Após análise estatística concluímos que as células espermáticas caninas descongeladas a 72ºC por 8 segundos apresentaram um maior somatório de bons resultados quanto aos testes de viabilidade espermática in vitro empregados.

Com objetivo de avaliar o efeito de dois protocolos de descongelação do sêmen canino congelado em três diluidores foram coletados ejaculados de nove cães. Cada ejaculado foi dividido em 3 amostras, centrifugado e os pellets tratados sob diferentes protocolos: 1º - meio á base de glicina e gema de ovo; 2º - meio á base de TRIS e 3º - meio M9. Foram envasadas 28 palhetas de 0,5ml segundo cada protocolo. Amostras tratadas sob cada protocolo foram avaliadas (M1) quanto a motilidade, vigor e integridade das membranas. As palhetas foram refrigeradas a 5ºC por 60 min. e congeladas em N2. Uma amostra de cada protocolo foi avaliada quanto: motilidade, vigor e integridade das membranas após o equilíbrio (M2). Eram sempre descongeladas três pares de palhetas, sendo que cada par havia sido congelado sob um mesmo protocolo. Uma das palhetas de cada par era descongelada a 37ºC por 30 segundos e outra a 72ºC por 8 segundos. Cada grupo foi avaliado após o descongelamento (M3) quanto a motilidade e vigor espermático, avaliação computadorizada do movimento, integridade das membranas e avaliação acrossomal por meio de Fitc-PNA e PI. As amostras foram mantidas em banho Maria a 37ºC por 1h para o teste de longevidade espermática e reavaliadas (M4) quanto à motilidade e vigor espermáticos, integridade das membranas. Após análise estatística concluímos que as células espermáticas caninas descongeladas a 72ºC por 8 segundos apresentaram um maior somatório de bons resultados quanto aos testes de viabilidade espermática in vitro empregados.

Compacted mouse morulae were frozen at 0.3ºC/min. or 0.5ºC/min. from -6ºC to -24ºC or -32ºC in 10% of glycerol plus different sucrose concentrations with or without 0.1% of honeybee royal jelly. Embryos were thawed in water bath at 22ºC for 20 seconds and cryoprotectant dilution was done in three steps. Embryos were cultured in Whitten’s medium for 24, 48 and 72 hours at 37ºC, 5% of CO2 and 100% of humidity. The in vitro development ranged from 56.6% to 100% after 72 hours. Expanded blastocysts were transferred to pseudopregnant recipients on the third day of the estrous cycle. Viable fetuses rates for embryos frozen to -24 or -32ºC at 0.3ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose, 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly, 10% glycerol + 0.1% honeybee royal jelly or 10% glycerol were respectively: 28.1% and 13.6%, 48.7% and 31.9%, 28.6% and 13.2%, 20.0% and 42.4%. Viable fetuses for embryos frozen to -24ºC or -32ºC at 0.5ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose or 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly were respectively 29.0% and 15.3%, 48.8% and 32.0%. We can conclude that addition of 10% sucrose to 10% glycerol was efficient for embryo freezing at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitrogen at -24ºC. The honeybee royal jelly addition provided higher viable fetuses rates when embryos were cooled at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitrogen at -24ºC. | Embriões de camundongos foram congelados em 10% de glicerol adicionado de várias concentrações de sacarose e/ou 0,1% de geléia real, nas velocidades de 0,3ºC ou 0,5ºC/minuto até -24ºC ou -32ºC e descongelados em água a 22ºC durante 20 segundos. A diluição dos crioprotetores foi realizada em três etapas e o cultivo dos embriões no meio de Whitten em estufa com 5% de CO2, 100% de umidade e 37ºC por 72 horas. O desenvolvimento in vitro até blastocisto variou entre 56,6% e 93,4%, mostrando que 10% de sacarose + 10% de glicerol foi eficiente na congelação. Blastocistos expandidos oriundos de embriões congelados até -24 ou -32ºC à velocidade de 0,3ºC/minuto em soluções contendo 10% de glicerol + 10% de sacarose; 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real; 10% de glicerol + 0,1% de geléia real ou 10% de glicerol, transferidos para receptoras pseudoprenhes, apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 28,1% e 13,6%, 48,7% e 31,9%, 28,6% e 13,2%, 20,0% e 42,4%. Embriões congelados até -24ºC ou -32ºC a 0,5ºC/minuto nas soluções de 10% de glicerol + 10% de sacarose ou 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 29,0% e 15,3%, 48,8% e 32,0%. Adição de sacarose e de geléia real ao meio de congelação contendo 10% de glicerol proporcionou maiores taxas de fetos viáveis a 0,3ºC e 0,5ºC/minuto e imersão em nitrogênio líquido a -24ºC.

Embriões de camundongos foram congelados em 10% de glicerol adicionado de várias concentrações de sacarose e/ou 0,1% de geléia real, nas velocidades de 0,3ºC ou 0,5ºC/minuto até -24ºC ou -32ºC e descongelados em água a 22ºC durante 20 segundos. A diluição dos crioprotetores foi realizada em três etapas e o cultivo dos embriões no meio de Whitten em estufa com 5% de CO2, 100% de umidade e 37ºC por 72 horas. O desenvolvimento in vitro até blastocisto variou entre 56,6% e 93,4%, mostrando que 10% de sacarose + 10% de glicerol foi eficiente na congelação. Blastocistos expandidos oriundos de embriões congelados até -24 ou -32ºC à velocidade de 0,3ºC/minuto em soluções contendo 10% de glicerol + 10% de sacarose; 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real; 10% de glicerol + 0,1% de geléia real ou 10% de glicerol, transferidos para receptoras pseudoprenhes, apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 28,1% e 13,6%, 48,7% e 31,9%, 28,6% e 13,2%, 20,0% e 42,4%. Embriões congelados até -24ºC ou -32ºC a 0,5ºC/minuto nas soluções de 10% de glicerol + 10% de sacarose ou 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 29,0% e 15,3%, 48,8% e 32,0%. Adição de sacarose e de geléia real ao meio de congelação contendo 10% de glicerol proporcionou maiores taxas de fetos viáveis a 0,3ºC e 0,5ºC/minuto e imersão em nitrogênio líquido a -24ºC.

<p>This work studied the surgical technique for collecting embryos in the goat, using heterozygous donors for the 5/15 translocation, which were bred with translocated animals. At the same, time technical characteristics related to cryopreservation, thawing and cultivation of the structures were performed. Considering the superovulatory treatment, oestrus was observer 24 or 48 hours after removing the intravaginal sponge and 71 viable structures were yielded in 43 collections. The 1 -2 Propanediol proved to be an efficient cryoprotectant agent, and allowed the cultivation of all the embryos. This result was not observed when glycerol was used as a cryoprotectant agent. Adhesions due to multiple collections constitute a great challenge for the improvement of this technique, since they are considered a limiting factor to the use of donors in the beginning of their reproductive lives.</p> | <p>No presente trabalho foi realizado um estudo da técnica cirúrgica de coleta de embriões na espécie caprina, utilizando-se doadoras heterozigotas para a translocação 5/15, acasaladas com animal translocado. Simultaneamente foram observados aspectos técnicos inerentes à criopreservação, descongelação e cultivo das estruturas recuperadas. Frente ao tratamento superovulatório, o cio foi observado em 24 ou 48 horas após a remoção da esponja intravaginal e foram recuperadas 71 estruturas viáveis em 43 coletas. O 1 -2 Propanodiol mostrou-se eficiente criopreservador, permitindo cultivo de todos os embriões, fato não observado quando utilizou-se o Glicerol. As aderências provocadas pelas repetidas coletas constituem-se no grande desafio no sentido de se aperfeiçoar a técnica, pois são consideradas um fator limitante ao uso de doadores no início da vida reprodutiva.</p>

No presente trabalho foi realizado um estudo da técnica cirúrgica de coleta de embriões na espécie caprina, utilizando-se doadoras heterozigotas para a translocação 5/15, acasaladas com animal translocado. Simultaneamente foram observados aspectos técnicos inerentes à criopreservação, descongelação e cultivo das estruturas recuperadas. Frente ao tratamento superovulatório, o cio foi observado em 24 ou 48 horas após a remoção da esponja intravaginal e foram recuperadas 71 estruturas viáveis em 43 coletas. O 1 -2 Propanodiol mostrou-se eficiente criopreservador, permitindo cultivo de todos os embriões, fato não observado quando utilizou-se o Glicerol. As aderências provocadas pelas repetidas coletas constituem-se no grande desafio no sentido de se aperfeiçoar a técnica, pois são consideradas um fator limitante ao uso de doadores no início da vida reprodutiva.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=>80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (>60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=<59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), constatou-se que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa.

Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P>;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P<0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P<0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.