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Vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro e expostos à citocalasina B | Vitrification of oocytes and in vitro produced bovine embryos exposed to cytochalasin B Полный текст
2002
Mezzalira, Alceu | Viera, Arnaldo Diniz | Barbieri, Dilmar Paulo | Machado, Mariana Fernandes | Thaler Neto, André | Bernadi, Mari Lourdes | Silva, Carlos Antônio Mondino | Rubin, Mara Iolanda Batistella
Foi avaliada a influência da citocalasina B na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No Experimento I, 956 oócitos foram maturados por 22h, sendo imediatamente vitrificados (tratamento Vitri) ou expostos por 15 a 20 minutos, à solução com 7,5µg/mL (tratamento CB7,5Vitri) ou 45µg/mL (tratamento CB45Vitri) de citocalasina B, antes da vitrificação. Após 30 segundos de exposição à SV1 [400µl TCM-Hepes com 10% soro fetal (SF), 50µl etilenoglicol (EG) e 50µl DMSO], e 20 segundos à SV2 (300µl trealose 1,0M + 20% SF, 100µl EG e 100µl DMSO), os oócitos foram vitrificados em palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi realizado a 37-38ºC em duas etapas de 5 minutos cada, em trealose 0,3M e 0,15M. Não houve diferenças (P>;0,05) nos percentuais de clivagem e desenvolvimento embrionário entre os tratamentos Vitri, Cito7,5Vitri e Cito45Vitri, os quais foram inferiores (P;0,05) no percentual de re-expansão e eclosão entre os grupos Vitri e CB45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao grupo controle. Os resultados indicam que, independentemente da dose utilizada, a exposição a citocalasina B não produz efeito benéfico na vitrificação de oócitos ou blastocistos bovinos produzidos in vitro. | In this study, the influence of cytochalasin B on the survival and development after vitrification of oocytes and in vitro produced (IVP) bovine blastocysts was evaluated. In the Experiment I, 956 oocytes were matured for 22h and were immediately vitrified (Vitri treatment) or exposed for 15-20 minutes, to 7.5µg/ml (CB7.5Vitri treatment) or 45µg/ml (CB45Vitri treatment) cytochalasin B solutions, before vitrification. After 30 seconds of exposure to SV1 [400µl TCM-Hepes with 10% fetal serum (SF), 50µl ethylene glycol (EG) and 50µl DMSO], and 20 seconds to SV2 (300µl trehalose 1,0M + 20% SF, 100µl EG and 100µl DMSO) solutions, the oocytes were vitrified in Open Pulled Straws (OPS). The rewarming was performed at 37-38ºC in two steps of 5 minutes each, into 0.3 and 0.15M trehalose solutions, respectively. There was no difference (P>;0.05) in the cleavage and embryo rates between Vitri, Cito7.5Vitri and Cito45Vitri treatments, which were inferior to control group (P;0.05), which were lower than those observed in the Control group (P<0.05). The results show that, independently of dose studied (7.5 or 45mg/ml), cytochalasin B has not a beneficial effect to the vitrification of oocytes and IVP bovine blastocysts.
Показать больше [+] Меньше [-]Influência da gestação e do puerpério sobre o leucograma de caprinos da raça Saanen, criados no Estado de São Paulo | Influence of pregnancy and puerperium in the leucogram of Saanen goats (Capra hircus), bred in the state of São Paulo Полный текст
2002
Viana, Rinaldo Batista | Birgel Junior, Eduardo Harry | Ayres, Maria Consuelo Caribé | Biojoni, Fernanda de Souza Meirelles | Souza, Maria do Carmo Custódio de | Birgel, Eduardo Harry
Para avaliar a influência da gestação e do puerpério sobre os constituintes do leucograma de caprinos da raça Saanen foram colhidas 150 amostras de sangue, distribuídas em 5 grupos com 30 animais cada: cabras não prenhes; fase inicial da gestação (30 -| 60 dias de prenhez); fase média da gestação (60 -| 120 dias de prenhez); fase final da gestação (>; 120 dias de prenhez); e recém-paridas (< 30 dias de puerpério). Nas amostras de sangue, colhidas em frascos contendo EDTA, foi realizada a contagem do número total de leucócitos em câmara de Neubauer, utilizando-se o líquido de Thoma como diluidor e a contagem diferencial de leucócitos,efetuada em esfregaços sangüíneos, corados pelo Método de Rosenfeld. Observou-se a influência da gestação sobre o leucograma, pois o quadro leucocitário foi caracterizado por uma diminuição gradual do número de leucócitos com o avançar da gestação, atingindo seus menores valores no final da gestação e no puerpério. Essa diminuição ocorreu devido ao comportamento observado para o número absoluto de linfócitos, que também diminuiu com a evolução da gestação. Dessa forma, o quadro leucocitário tornou-se, predominantemente, neutrofílico na fase final da gestação e no puerpério. | With the intention of evaluating the influence of pregnancy and puerperium in the leucogram of Saanen goats (Capra hircus), blood samples were taken from 150 goats bred on the State of São Paulo and were allotted into 5 experimental groups of 30 goats each as described: non-pregnant; initial pregnancy (30 to 60 days of pregnancy); middle pregnancy (60 to 120 days of pregnancy); late pregnancy (more than 120 days of pregnancy); kidding goats (until 30 days after parturition). The blood samples were collected with EDTA and submitted to the following tests: total leukocyte counts (in the modified Neubauer hemocytometer, using Thoma's liquid as a dilute); and differential leukocyte count (made up with blood smears and stained with Rosenfeld method). The influence of pregnancy and puerperium on the leucogram was verified due to a gradual decrease on the number of leucocytes further on in pregnancy, reaching its lower values at the end of pregnancy and puerperium. This decrease occurred due to behavior observed on the absolute number of lymphocytes that also decreased further on in pregnancy. Therefore the leucograma became mostly neutrophilic at the end of pregnancy and puerperium.
Показать больше [+] Меньше [-]Expressão relativa de fator semelhante a insulina (IGFI) e receptor do homômonio folículo estimulante (FSHR) em folículos e tecido ovariano de Bos primigenius (Nelore) | Relative expression of insulin like growth factor I (IGFI) and follicle stimulating hormone receptor (FSHR) in follicles and ovarian tissue from Bos primigenius indicus (Nelore) Полный текст
2002
Ferreira, Jorge Luís | Toniolli, Ricardo | Duarte, Ana Beatriz Graça | Campagnari, Francine | Boscaro, Ariadne Padovez | Pazini, Fabiane Siqueira | Garcia, José Fernando
O aperfeiçoamento das técnicas que objetivam a exploração do potencial reprodutivo das fêmeas requer a compreensão mais ampla dos mecanismos de controle de desenvolvimento folicular. Uma alternativa de estudo nesta esfera, é a quantificação da expressão relativa de genes envolvidos nos processos de recrutamento, seleção e desenvolvimento folicular, pelo emprego da técnica de transcrição - reversa associado a reação em cadeia pela polimerase (RT - PCR). O presente trabalho objetivou quantificar a expressão relativa dos genes insulin-like growth factor I (IGF-I) e do receptor do hormônio folículo estimulante (FSHR), tendo como controle interno o gene da gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Foram utilizados ovários bovinos de animais de matadouro em diferentes fases do ciclo estral. O RNA total dos folículos e tecido ovarianos foi purificado por TRIZOL. As reações de RT-PCR foram realizadas com o "kit" SuperScriptTM First-Strand. Os produtos de PCR foram analisados em gel de agarose e as bandas submetidas à análise densitométrica. Todos os genes foram amplificados observando-se a curva exponencial de amplificação, a validação do método foi realizada através de análise de regressão, sendo estabelecido o coeficiente de amplificação (E). A expressão relativa de mRNA para cada gene de interesse foi calculada pela fórmula estabelecida por Prelle et al.12. Em todos os tecidos analisados, todos os genes foram expressos, sobressaltando-se diferenças nos diferentes ciclos estudados. Com relação os dados referentes ao coeficiente de amplificação (E), observou-se tanto para gene controle (GAPDH), como para o gene IGF-I concordância nos valores encontrados para as diferentes classes analisadas. Quanto ao gene IGF-I, a interpretação dos achados para a expressão relativa de mRNA pode está relacionada ao caráter constitutivo dessa proteína ou devido os transcritos não serem dependentes dos níveis de FSH. Observou-se diferenças na expressão relativa de mRNA de FSHR entre as classes de tecidos analisados, o que pode ser explicado pela variação do número de receptores nas células da granulosa nas diferentes fases do ciclo estral. Pode-se perceber a partir desse estudo que a técnica de RT-PCR semi quantitativo é de grande importância biotecnológica, possibilitando auxílio na compreensão da dinâmica folicular. Entretanto esses estudos devem ser ampliados com outros genes para melhor compreensão das etapas fisiológicas envolvidas na foliculogênese. | The improvement of techniques to maximize reproductive potential of females needs the whole comprehension of the controlling mechanisms of follicular development. An alternative for this purpose is the quantification of relative gene expression from those genes involved in recruitment, selection and follicular development, using reverse transcriptase - polymerase chain reaction (RT - PCR). The present study aimed to quantify relative gene expression from insulin-like growth factor I (IGF-I) and follicle stimulating hormone receptor (FSHR) in cattle (Bos primigenius indicus), using as internal control the gliceraldheyde 3 phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene. Ovaries in different estral cycle stages were obtained from slaughtered animals. Total RNA from follicles and ovarian tissue was purified and the RT-PCR conditions were standardized. PCR products were analyzed in ethydium bromide agarose gels and the bands submitted to densitometric analysis. Exponential amplification curves were constructed and the method's validation was performed using regression analysis to determine the amplification coefficient (E) for each of the three genes. Relative expression for each gene was calculated using the formula described by Prelle et al.12. In every sample there was gene expression detected for each gene showing differences related to cycle temperature. Amplification coefficient (E) was similar between control gene (GAPDH) and IGFI, independently of the class analyzed. IGFI linear amplification could be related to the constitutive characteristic of this protein since the transcripts are not dependents of FSH levels. It was observed difference in FSHR mRNA expression between the classes analyzed. It could be due to the variation of the receptor number in granulosa cells for each different phase of estral cycle. Semi-quantitative RT-PCR has a large application in biotechnology since it is useful to help us the better understanding of follicular dynamics. However these studies must be conducted using other genes in order to provide new clues for the physiology of folliculogenesis.
Показать больше [+] Меньше [-]Polinização entomófila em pessegueiro (Prunus persica L.) | Entomophilous pollination in peach (Prunus persica L.) Полный текст
2002
Mota, Manoel Octávio Silveira da | Nogueira-Couto, Regina Helena
Este experimento, realizado na região de Jaboticabal (SP), utilizou uma cultura de pêssego (Prunus persica L.), durante a sua florada com a finalidade de verificar a atuação dos insetos visitantes nas flores na produção de frutos. A concentração média de açucares no néctar e a quantidade média produzida por dia de néctar é de 27,9% e de 3,2 mg, respectivamente. O peso médio das anteras por flor foi de 1,59 mg. A abelha Apis mellifera (73%) foi o principal inseto visitante seguida da Trigona spinipes (17%) e Xylocopa sp (4%). Observou-se a presença de beija-flores (6%), coletando néctar. A freqüência máxima das abelhas A. mellifera, para coleta de néctar e pólen, ocorreu as 12 horas. O número de frutos resultantes do tratamento em que as flores recebiam as visitas foi 14% maior que no tratamento em as flores não eram visitadas. Do total de frutos colhidos no tratamento coberto (sem visitas), 82% apresentaram-se perfeitos, com boa formação e simetria. No tratamento descoberto, 90,2% apresentaram-se com boa formação, havendo diferença estatística entre os dois tratamentos. | This experiment, accomplished in the area of Jaboticabal (SP), it used a peach culture (Prunus persica L.), during yours bloomed with the purpose of verifying the insects visitors performance in the flowers in the production of fruits. The medium concentration of sugar in the nectar and the medium amount produced a day of nectar it is of 27,9% and of 3,2 mg, respectively. The medium weight of the anthers for flower was of 1,59 mg. The honeybee Apis mellifera (73%) it was the principal insect visitor followed by the Trigona spinipes (17%) and Xylocopa sp (4%). The presence of hummingbird was observed (6%), collecting nectar. The maximum frequency of the bees A. mellifera, for nectar collection and pollen, happened the 12 hours. The number of resulting fruits of the treatment in that the flowers received the visits it was 14% larger than in the treatment in the flowers were not visited. Of the total of fruits picked in the covered treatment (without visits), 82% came perfect, with good formation and symmetry. In the discovered treatment, 90,2% came with good formation, having difference statistics among the two treatments.
Показать больше [+] Меньше [-]Efeitos da sincronização do estro e da inseminação artificial sobre a performace reprodutiva de ovelhas Merino | Effect of estrus synchronization and artificial insemination on reproductive performance of Merino sheep Полный текст
2002
Simonetti, Laura | Ramos, Guillermo | Gardón, Juan Carlos
Foi estudada a resposta reprodutiva (taxa de parição e tamanho de leitigada) das ovelhas inseminadas artificiosamente após o tratamento de sincronização do estro em relação à carneiros, dose de PMSG e número de inseminações artificiales. Ovelhas adultas Merino em estação reprodutiva (primavera), foram tratadas com esponjas intravaginais impregnadas com 60 mg acetato de medroxiprogesterona (MAP) para sincronização do estro. As esponjas foram retiradas após 14 dias e foram administradas i.m. 375 ou 400 UI gonadotrofina da égua pregnhe (PMSG). Utilizaram-se carneiros vasectomizados para a detecção do cio. As ovelhas que apresentaram cio foram inseminadas artificiosamente com sêmen fresco diluido de carneiros, uma ou duas vezes. A taxa de parição não foi afectada pelos carneiros ou pelo número de inseminações. A taxa de parição foi maior nas ovelhas tratadas com 400 UI PMSG que aquêlas tratadas com 375 UI (76.47% v 54.32%; p<0.01). O tamanho de leitigada não sofreu influência das variáveis estudadas. | The experiment was conducted to determine the reproductive performance (lambing rate and litter size) of sheep artificially inseminated at a synchronized estrus in relation to rams, dose of PMSG and number of artificial inseminations performed. During spring cyclic Merino adult ewes were treated with intravaginal sponges impregnated with 60 mg medroxyprogesterone acetate (MAP). After 14 days sponges were removed and the females received an intramuscular injection of either 375 or 400 IU pregnant mare serum gonadotropin (PMSG). Estrus detection was performed with vasectomized rams. Females in estrus were cervically inseminated with fresh diluted semen from different rams either once or twice. Data on lambing rate and litter size were recorded. Lambing rate was not affected by rams or number of inseminations. A higher proportion of ewes that received 400 IU PMSG lambed compared with those receiving 375 IU PMSG (76.47% v 54.32%; p<0.01). Litter size was not affected by any of the variables under study.
Показать больше [+] Меньше [-]Capacitação espermática in vitro com heparina e cálcio ionóforo e sua correlação com a fertilidade em touros | Evaluation of in vitro sperm capacitation with heparin and calcium ionophore in bulls Полный текст
2002
Assumpção, Mayra Elena Ortiz D'Avila | Haipeck, Kátia | Lima, Alecsandra Sobreira de | Mello, Marco Roberto Bourg de | Oliveira, Lilian Jesus de | Oliveira, Viviane Purri de | Tavares, Liliam Mara Trevisan | Visintin, José Antônio
O objetivo deste estudo foi avaliar os protocolos de capacitação espermática in vitro com 100 mg/ml de heparina e 5 mM de cálcio ionóforo e correlacionar a capacitação com a fertilidade in vivo. A capacitação espermática foi avaliada pela coloração com iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína e pela coloração tripla com vermelho congo, vermelho neutro e giemsa. Os espermatozóides foram avaliados quanto a viabilidade (vivos ou mortos) e a qualidade do acrossomo (lesados ou íntegros), sendo caracterizados como capacitados (vivos e lesados), não capacitados (vivos e íntegros) e mortos (lesados ou íntegros). A heparina apresentou 64,54% e 39,16% e o cálcio ionóforo 36,41% e 18,11% de espermatozóides capacitados, respectivamente, pela epifluorescência e coloração tripla. Os touros foram divididos em três grupos de fertilidade, sendo o Grupo A ;68%. Nos três grupos houve diferença significativa (p;0,01) para os espermatozóides capacitados, não capacitados e mortos entre os grupos A, B e C, tanto na epifluorescência quanto na coloração tripla para ambos capacitores (heparina e cálcio ionóforo). Não houve correlação entre os espermatozóides capacitados in vitro e a taxa de fertilidade a campo. A heparina apresentou melhor taxa de espermatozóides capacitados e a epifluorescência mostrou-se mais eficiente na detecção da capacitação espermática (p<0,01). | The aim of this particular study was to test in vitro sperm capacitation protocols, using heparin (100mg/ml) and calcium ionophore (5mM). Propidium iodide and carboxifluorescein diacetate (IP/CFDA) in a fluorescence microscope as well as triple stain (congo red, neutral red and Giemsa) in Phase contrast microscope were used as staining. The spermatozoa were classified according to its viability (alive or dead) and acrossome integrity (damaged or intact). They were considered as follows: capacitated (alive and damaged); non capacitated (alive and not damaged) and dead (damaged or intact). The heparin group showed a ratio of 64.54% and 39.16% of capacitated spermatozoa in IP/CFDA and triple stain, respectively. In the calcium group, 36.41% and 18.11% of spermatozoa were capacitated in IP/CFDA and triple stain, respectively. Bulls were divided into 3 groups according to their fertility rates as follows: Group A < 63%, Group B from 63 to 68% and Group C >; 68%. For all three groups there was significant differences (p;0.01), when observed capacitated, non capacitated and dead spermatozoa among groups A and B; A and C; B and C, using heparin and calcium ionophore in both stains. No correlation was seen between capacitation and fertility rates. Therefore heparin treatment showed better sperm capacitation rates than calcium ionophore. The IP/CFDA technique showed itself as being a better method to evaluate sperm capacitation than the triple stain (p<0.01).
Показать больше [+] Меньше [-]Tétano em um gato | Tetanus in a cat Полный текст
2002
Costa, Fabiano Séllos | Aguiar, Daniel Moura de | Giuffrida, Rogério | Farias, Marconi Rodrigues de | Torres Neto, Rafael
Relata-se neste artigo o caso de tétano em um gato macho de 3 anos 8 dias após a realização de orquiectomia bilateral, onde o histórico do animal associado aos achados clínicos e laboratoriais propiciaram a definição do diagnóstico. Mesmo após tratamento, o quadro evoluiu para tetania generalizada e óbito. Neste caso, a ação da neurotoxina na musculatura estriada esquelética do esfíncter uretral foi um fator agravante para a doença, levando à retenção vesical e azotemia pós-renal. | This article reports a tetanus case in a 3-year-old male cat 8 days after bilateral orchiectomy, where the animal historic associated with laboratory and clinical findings defined the diagnosis. Even after treatment, the case developed to generalized tetany and death. In this case, the neurotoxin action in skeletal striated musculature of urethral sphincter was an aggravating factor for this disease, causing retention of urinary bladder and postrenal azotaemia.
Показать больше [+] Меньше [-]Pontes de miocárdio em corações de javali | Myocardial bridges in wild boar heart Полный текст
2002
Nocetti, Luciana Mantovani | Bombonato, Pedro Primo | Santana, Marcelo Ismar Silva | Carneiro e Silva, Frederico Ozanam | Severino, Renato Souto
Twenty eight wild boar were studied, in order to observe the frequency, width and location of myocardial bridges. For the gross anatomical study, the coronary arteries of the heart had injected with a stained Neoprene "450" Latex solution; submitted to fixation whit 10% formol solution and dissection. Myocardial bridges were found in 57,14% of hearts the studied mean widths value was 1,47 cm and usually the bridges were located in the ventral portions (30,76%), and dorsal (26,92%) on the left and right coronary arteries. Multiple bridges were observed in 31,25% of the hearts, and their number ranged from two to six. | Vinte e oito corações de javalis foram estudados, observando-se a freqüência, largura e localização das pontes de miocárdio. Para o estudo macroscópico, a artéria coronária foi injetada com solução corada de Neoprene látex "450", com posterior fixação com solução de formaldeido a 10% para posterior dissecação. Pontes de miocárdio foram encontradas em 57,14% dos corações estudados, com altura variando por volta de 1,47 cm, sendo usualmente localizadas nas porções ventral (30,76%) e dorsal (26,92%) sobre as artérias coronárias direita e esquerda. Múltiplas pontes foram observadas em 31,25% dos corações e seu número variou de 2 a 6.
Показать больше [+] Меньше [-]Características morfológicas do miocárdio ventricular de Tambaqui (Colossoma macropomun; Characidae, Cuvier, 1818) | Morphological characteristics of the ventricular myocardium of Tambaqui (Colossoma macropomun; Characidae, Cuvier, 1818) Полный текст
2002
Simões, Karina | Vicentini, Carlos Alberto | Orsi, Antonio Marcos | Cruz, Claudinei da
O Colossoma macropomun, peixe teleósteo com hábito natatório intenso, apresentou ventrículo cardíaco com forma piramidal e miocárdio com estrutura mista, sendo formada por uma camada compacta externa e outra esponjosa interna. Esta estrutura bilaminar diferenciada, atualmente, tem sido correlacionada com o hábito natatório e com a morfologia ventricular. | The neotropical teleost fish Colossoma macropomun an active swimming species showed cardiac ventricle with pyramidal shape and myocardium with mixed structure. The myocardium presented an outer compact layer and an inner spongy layer whose particular bilaminar structure hitherto has been correlated to swimmer habit as well as to ventricular shape.
Показать больше [+] Меньше [-]Avaliação clínica, colpo-citológica e endocrinológica de fêmeas de Cerdocyon thous do zoológico do Rio de Janeiro | Serial clinical, colpo-cytological and endocrinological evaluations of Cerdocyon thous bitches from the Rio de Janeiro zoo Полный текст
2002
Monteiro, Rafael Veríssimo | Santos, Márcio Ricardo Costa dos | Vianna, Eduardo Borges | Araújo, Tatiana Cardoso Soares de | Verona, Carlos Eduardo | Fedullo, Luís Paulo Luzes
Foram realizadas avaliações clínicas, colpo-citológicas e endocrinológicas de duas fêmeas de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) pertencentes à Fundação RIOZOO, Rio de Janeiro, Brasil, durante um período de 10 meses. As fêmeas, consideradas clinicamente saudáveis, foram alojadas em recintos diferentes, cada uma com dois machos. Os recintos, de substrato arenoso distavam cerca de 500 m um do outro. A técnica colpo-citológica utilizada nas fêmeas de cachorro-do-mato segue os mesmos métodos para cachorros domésticos. É interessante ressaltar que não foi observado nenhum eritrócito nos esfregaços vaginais analisados, em qualquer fase do ciclo estral, em ambas as fêmeas. A diferenciação dos tipos celulares vaginais durante as diferentes fases do ciclo estral segue os mesmos padrões demonstrados por cadelas domésticas. Os níveis de estradiol e progesterona seguiram os mesmos padrões que ocorre nas fêmeas de cachorros domésticos. A progesterona atingiu níveis máximos (46 ng/ml) por volta do décimo dia de gestação. A variação do estradiol demonstrou que, ainda que as fêmeas possam apresentar picos deste hormônio, durante o ano, tão altos como durante a época reprodutiva, a reprodução ocorre, realmente, no final do inverno e primavera. É impossível inferir, neste trabalho, se a presença do macho próximo à fêmea durante o ano todo poderia induzir a produção de estradiol, redundando no que seria considerado um artifício de cativeiro. | Serial clinical, colpo-cytological and endocrinological examinations of two five-year-old females of the crab-eating dog (Cerdocyon thous), from the RIOZOO Foundation in the State of Rio de Janeiro - Brazil, were carried out over a 10-month period. Clinically healthy animals were kept in sand substratum enclosures, located 500m apart from each other. They were each housed with two males. The colpo-cytological technique employed for Cerdocyon thous used methods similar to those developed for domestic bitches. Unlike domestic dogs, blood cells were absent in all phases of the estrus cycle, including the pro-estrus phase. Differentiation of each type of vaginal cells during the estrus cycle phases in this species follows the same patterns shown by domestic bitches. The estradiol and progesterone levels were similar to those occurring in domestic bitches. The progesterone levels reach their maximum (46 ng/ml) around the 10th day of pregnancy. The estradiol analysis demonstrated that, although levels of this hormone could be high at various times throughout the year, mating actually occurs in late winter and in spring. It was impossible to evaluate whether males and females kept in close proximity throughout the entire year would stimulate the production of estradiol, resulting in what would be considered a captivity artifice.
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