Este estudo foi realizado para avaliar o efeito da contaminação da água por cádmio sobre a taxa de fertilização dos ovócitos e de eclosão dos ovos e a duração da motilidade espermática em jundiá (Rhamdia quelen). Foram realizados dois ensaios: no ensaio 1, foi avaliado o efeito do cádmio sobre a fertilização artificial dos ovócitos e a eclosão dos ovos e, no ensaio 2, o efeito do cádmio sobre a duração da motilidade espermática. Em ambos os ensaios, adotou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado com cinco níveis de cádmio na água (0; 20; 50; 80 e 110 mg L-1), avaliados com quatro (ensaio 1) ou três repetições (ensaio 2). As taxas de fertilização e eclosão tiveram resposta linear, mantendo-se constantes até os níveis de 28,6 e 40,4 mg L-1, respectivamente. A partir desses níveis, ocorreu um efeito linear inversamente proporcional entre as taxas de fertilização e eclosão e o aumento dos níveis de cádmio. O aumento do nível de cádmio na água teve efeito linear inverso na duração da motilidade espermática, proporcionando redução de 21,8s em água limpa para 10,6s em água contaminada contendo 110 mg-1. Níveis a partir de 20,0 e 28,6 mg L-1 influenciam espermatozoides e ovócitos de jundiá, respectivamente.<br>The objective of this work was to evaluate the effect of water contaminated by cadmium on the rates of oocyte fertilization and egg hatching, and sperm motility duration on jundiá catfish (Rhamdia quelen). Two trials were performed: in trial 1, it was evaluated the effect of cadmium on the artificial fertilization of oocytes and egg hatching and in trial 2, the effects of cadmium on the sperm motility duration were evaluated. In both trials, it was used a completely randomized experimental design with five levels of cadmium in the water (0; 20; 50; 80 and 110 mg L-1) evaluated with four (trial 1) or three replicates (trial 2). Fertilization and hatching rates showed linear response, remaining constant up to the levels of 28.6 and 40.4 mg L-1, respectively. From these levels, a linear effect inversely proportional between the fertilization and hatching rates and an increase in the levels of cadmium occurred. The increase on the level of cadium in the water had an inverse linear effect of sperm motility duration providing a reduction from 21.8s in clean water to 10.6s in contaminated water containing 110 mg L-1. Levels from 20.0 to 28.6 mg L-1 influence sperm and oocytes of jundiá catfish, respectively.

Resumen La crioconservación es una herramienta biotecnológica que en peces está orientada principalmente a la conservación criogénica de semen como estrategia de preservación del recurso genético y a su uso para la producción de alevinos con fines diferentes. Actualmente, los protocolos de crioconservación seminal en peces de agua dulce establecen una amplia variedad de procedimientos cuya efectividad se basa en aspectos ligados a la calidad seminal post-descongelación y la fertilidad, así como su relación con el desarrollo de la progenie. El efecto de la conservación del semen en nitrógeno líquido por periodos amplios de tiempo también toma importancia en ésta biotecnología. Por lo anterior, el objetivo de la presente revisión es describir aspectos biotecnológicos, celulares y bioquímicos asociados al proceso de crioconservación seminal en peces dulceacuícolas, resaltando los avances, las limitaciones y sus perspectivas.

Se evaluó el efecto de la época en la calidad de indicadores biofísicos y biológicos del semen. Para ello, se analizó un total de 254 eyaculados recolectados durante un año y procedentes de cuatro sementales bufalinos de 2 a 3 años de edad. La extracción de semen se realizó con vagina artificial, en el horario de 8:00 am a 10:00 am. Se utilizó un régimen de extracción de eyaculados dos veces por semana, los indicadores de calidad seminal evaluados fueron: volumen, motilidad, concentración, porcentaje de espermatozoides vivos, anomalías y el pH. Los datos fueron agrupados por trimestres en correspondencia con las características climáticas y teniendo en cuenta la época de apareamiento espontánea en Cuba (sep-nov, dic-feb, mar-may, jun-ago). Los mayores valores para el índice de temperatura ¡V humedad y la radiación solar fueron observados en el trimestre junio ¡V agosto. Sólo se encontró efecto significativo del trimestre de recolección para el volumen de eyaculados y anomalías espermáticas. El valor más alto de volumen (P0.05), se observó en el trimestre de marzo-mayo y la mayor tasa de anomalías (P 0.001) en el trimestre junio-agosto. Se concluye que las peores condiciones ambientales durante el período junio ¡V agosto incrementa la proporción de anomalías espermáticas. | The effect of the season of the year on the biophysical and biological quality of water buffalo semen was evaluated. For this, a total of 254 ejaculations collected during 1 year from 4 buffalo sires (2 to 3 years old) was analyzed. Semen extraction was carried out using an artificial vagina from 8 to 10 a.m. The ejaculation extraction regime was twice per week, and the seminal quality indicators examined were: volume, motility, concentration, spermatozoa alive, abnormalities and pH. Data were grouped by trimester according to the climatic characteristics and taking into account the spontaneous mating season in Cuba (Sept.-Nov., Dec.-Feb. March-May, June-August). The highest values for temperature-humidity and solar radiation were observed in June-August. There was only found a significant effect of the collection trimester for ejaculation volume and spermatic abnormalities. The highest volume value (P 0.05) was observed in March-May and the highest abnormality rate (P "£ 0.001) in June-August. It is concluded that the worst environmental conditions during June-August increase the proportion of spermatic abnormalities.

Twenty-four ejaculates were collected from five boars for the conventional freezing procedure at the Veterinary School of Hannover (group 1A-1B) and for an extended holding time procedure (group 2A-2B and 3A-3B). The semen were prediluted in two different diluents, coconut water in natura and Merck I medium before freezing (experiment A) and prediluted only with Merck I, but cooling and freezing with coconut water in natura or lactose (experiment B). The semen were arranged into three groups according to the different holding periods before freezing, group 1A-1B (sperm-rich phase, preserved for 4 hours by 15°C), group 2A-2B (sperm-rich phase, preserved for 16 hours by 18°C) and group 3A-3B (total semen, preserved for 16 hours by 18ºC). The quality of the thawed boar spermatozoa was evaluated by subjective motility (SMOT), computerassisted motility (Cell Motion Analyser, Strömberg-Mica - CMOT) and morphology of acrosomal ridges (NAR) after fixation in formol citrate. The acrosomal integrity (NAR) was 65% (group 1A), 71% (group 2A) and 75% (group 3A) for semen prediluted with coconut water and 60% (group 1A), 68% (group 2A) and 68% (group 3A) for semen prediluted with Merck I medium, respectively (experiment A); and 56% (group 1B), 68% (group 2B) and 73% (group 3B) for semen freezing with coconut water diluent, and 60% group 1B), 68% (group 2B and 3B) for semen freezing with lactose (experiment B). Thus, did not differ significantly (p<0.05) between both pre-diluents and both freezing diluents. However, the post thaw motility by both SMOT and CMOT and the acrosome integrity (NAR) were significantly higher (p<0.05) in the semen preserved for extended holding time (group 2A-2B and 3A-3B) than those for short time (group 1A-1B). It is concluded that the extended holding time has a better effect to protect acrosome of boar spermatozoa and also maintain sperm motility. Therefore, preserving boar semen for longer period before freezing is indicated for subsequent research on in vitro research with boar semen. And because the results using coconut prediluent and diluent were similar to that using Merck I medium (experiment A) and using lactose (experiment B), it is also indicated to use coconut for diluent and for freezing boar semen. | Foram utilizados vinte e quatro ejaculados de cinco diferentes cachaços na congelação de sêmen suíno, sendo doze deles pré-diluídos em água de coco in natura e em Merck I, utilizando a lactose como diluidor de refrigeração e de congelação (experimento A) e doze pré-diluídos apenas com Merck I. Após três diferentes pré-tratamentos, a água de coco in natura foi utilizada como diluidor de refrigeração e de congelação, sendo a lactose utilizada como controle (experimento B). Seguiu-se a metodologia convencional de congelação de sêmen desta espécie -Tierärztliche Hochschule Hannover (grupo 1A-1B) e um novo processo com longo período de equilíbrio (grupos 2A-2B e 3A-3B). A qualidade do sêmen descongelado foi avaliada pela motilidade subjetiva (SMOT), motilidade computadorizada (CMOT) e morfologia das células com borda apical normal (NAR), após fixação em formol citrato. As porcentagens de espermatozóides com NAR foram 65% (grupo 1A), 71% (grupo 2A) e 75% (grupo 3A) para o sêmen pré-diluído em água de coco e 60% (grupo 1A), 68% (grupo 2A) e 68% (grupo 3A) para aquele pré-diluído com Merck I (experimento A); e 56% (grupo 1B), 68% (grupo 2B) e 73% (grupo 3B) para o sêmen congelado em água de coco e 60% (grupo 1B), 68% (grupo 2B e 3B) para o sêmen congelado em lactose (experimento B). Não havendo, portanto, diferença estatística entre os dois pré-diluentes e os dois diluentes de refrigeração e de congelação (p&lt;0,05). Concluiu-se, portanto, que 1) os pré-tratamentos com longo período de equilíbrio têm melhor efeito na proteção do acrossoma do espermatozóide suíno e para manter a motilidade espermática e 2) a água de coco como pré-diluente e diluente para refrigeração e de congelação é semelhante ao Merck I (experimento A) e a lactose (experimento B), sendo portanto indicado para pré-diluir e congelar sêmen suíno.

Este estudo foi realizado para avaliar o efeito da contaminação da água por cádmio sobre a taxa de fertilização dos ovócitos e de eclosão dos ovos e a duração da motilidade espermática em jundiá (Rhamdia quelen). Foram realizados dois ensaios: no ensaio 1, foi avaliado o efeito do cádmio sobre a fertilização artificial dos ovócitos e a eclosão dos ovos e, no ensaio 2, o efeito do cádmio sobre a duração da motilidade espermática. Em ambos os ensaios, adotou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado com cinco níveis de cádmio na água (0; 20; 50; 80 e 110 mg L-1), avaliados com quatro (ensaio 1) ou três repetições (ensaio 2). As taxas de fertilização e eclosão tiveram resposta linear, mantendo-se constantes até os níveis de 28,6 e 40,4 mg L-1, respectivamente. A partir desses níveis, ocorreu um efeito linear inversamente proporcional entre as taxas de fertilização e eclosão e o aumento dos níveis de cádmio. O aumento do nível de cádmio na água teve efeito linear inverso na duração da motilidade espermática, proporcionando redução de 21,8s em água limpa para 10,6s em água contaminada contendo 110 mg-1. Níveis a partir de 20,0 e 28,6 mg L-1 influenciam espermatozoides e ovócitos de jundiá, respectivamente. | The objective of this work was to evaluate the effect of water contaminated by cadmium on the rates of oocyte fertilization and egg hatching, and sperm motility duration on jundiá catfish (Rhamdia quelen). Two trials were performed: in trial 1, it was evaluated the effect of cadmium on the artificial fertilization of oocytes and egg hatching and in trial 2, the effects of cadmium on the sperm motility duration were evaluated. In both trials, it was used a completely randomized experimental design with five levels of cadmium in the water (0; 20; 50; 80 and 110 mg L-1) evaluated with four (trial 1) or three replicates (trial 2). Fertilization and hatching rates showed linear response, remaining constant up to the levels of 28.6 and 40.4 mg L-1, respectively. From these levels, a linear effect inversely proportional between the fertilization and hatching rates and an increase in the levels of cadmium occurred. The increase on the level of cadium in the water had an inverse linear effect of sperm motility duration providing a reduction from 21.8s in clean water to 10.6s in contaminated water containing 110 mg L-1. Levels from 20.0 to 28.6 mg L-1 influence sperm and oocytes of jundiá catfish, respectively.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar o consumo de água tratada da produção de óleo na qualidade seminal do macho reprodutor; Para tanto, foram selecionados 16 touros entre 4 e 5 anos, distribuídos em dois grupos nos centros de La Libertad de Agrosavia em Villavicencio e na Área de Sustentabilidade Agroenergética, ASA em Acacias com disponibilidade de água tratada dos campos de petróleo, Apiay (A ) e Castilla (C) respectivamente. Os animais selecionados foram distribuídos aleatoriamente para cada local em 4 tratamentos: 1) Consumo de água de produção tratada 100%; 2) 50% de consumo de água de produção tratada e 50% de consumo de água bruta; 3) consumo de mistura 25% de água de produção tratada e 75% de água bruta; e 4) 100% de consumo de água bruta. As variáveis ​​consideradas foram: qualidade seminal para A e C, determinada por sistema computadorizado, e fertilidade in vitro para A, avaliada por coloração fluorescente, Hoechst 33342. Os resultados indicaram, para qualidade seminal, que os tratamentos que consumiram A e C em cada localidade apresentaram diferenças (P <0,05) para motilidade, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, espermatozóides móveis / 100 células avaliadas, no tratamento dois respectivamente e em A para morfologia, 76,67 ± 2,06 espermatozóides normais / 100 no tratamento quatro, o índice de qualidade espermática (IQE) não apresentou diferença (P> 0,05). Os resultados de ligação das zonas pelúcidas de espermatozóides mostraram diferenças entre os tratamentos (P <0,05), como na fertilização in vitro, entretanto, o comportamento dessas mudanças não indica uma associação com o consumo desse tipo de água. O estudo mostra que não há mudanças fortes ou negativas que mostram um efeito sobre a fertilidade do touro devido ao consumo de água de produção tratada. | Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar el consumo de agua tratada proveniente de la producción petrolera en la calidad seminal del macho bovino reproductor, para ello se seleccionaron 16 toros entre 4 y 5 años distribuidos en dos grupos en los centros de investigaciones La Libertad de Agrosavia en Villavicencio y el Área de sostenibilidad agroenergetica, ASA en Acacias con disponibilidad de agua tratada de los campos petroleros, Apiay (A) y Castilla (C) respectivamente. Los animales seleccionados fueron distribuidos al azar para cada localidad en 4 tratamientos: 1) Consumo del 100 % agua de producción tratada; 2) consumo de mezcla 50 % agua de producción tratada y 50 % agua cruda; 3) consumo de mezcla 25 % agua de producción tratada y 75 % agua cruda; y 4) consumo 100 % agua cruda. Las variables consideradas fueron: calidad seminal para A y C determinadas por un sistema computarizado y de fertilidad in vitro para A evaluada por tinción fluorescente, Hoechst 33342. Los datos se analizaron estadística descriptiva, análisis de varianza (ANOVA) y pruebas de comparación de medias, Tukey, en un modelo de medidas repetidas en el tiempo. Los resultados indicaron, para calidad seminal, que los tratamientos que consumieron A y C en cada localidad presentaron diferencias (P < 0,05) para motilidad, 75,00±4,50, 69,24±4,13, espermatozoides motiles/100 células evaluadas, en el tratamiento dos respectivamente y en A para morfología, 76,67±2,06 espermatozoides normales/100 en el tratamiento cuatro, el índice de calidad espermática (ICE) no mostró diferencia (P > 0,05). Los resultados de unión espermatozoide - zona pelúcida mostraron diferencias entre tratamientos (P < 0,05), al igual que en fecundación in vitro, sin embargo, el comportamiento de estos cambios no indica asociación con el consumo de este tipo de agua. El estudio muestra que no se observan cambios contundentes o negativos que demuestren efecto en la fertilidad del toro por consumo de agua de producción tratada. | Abstract The objective of this study was to evaluate the consumption of treated water from oil production in the seminal quality of the breeding male; To this end, 16 bulls between 4 and 5 years old were selected, distributed in two groups at Agrosavia’s La Libertad centers in Villavicencio and the Agroenergetic Sustainability Area, ASA in Acacias with availability of treated water from the oil fields, Apiay (A) and Castilla (C) respectively. The selected animals were distributed randomly to each location in 4 treatments: 1) Consumption of 100% treated production water; 2) 50% consumption of treated production water and 50% raw water consumption; 3) mixing consumption 25% treated production water and 75% raw water; and 4) 100% raw water consumption. The variables considered were: seminal quality for A and C determined by a computerized system, and in vitro fertility for A evaluated by fluorescent staining, Hoechst 33342. The data were analyzed descriptive statistics, analysis of variance (ANOVA) and means comparison tests, Tukey, in a model of measures repeated over time. The results indicated, for seminal quality, that the treatments that consumed A and C in each locality presented differences (P <0,05) for motility, 75,00 ± 4,50, 69,24 ± 4,13, motile sperm / 100 cells evaluated, in treatment two respectively and in A for morphology, 76,67 ± 2,06 normal sperm / 100 in treatment four, the sperm quality index (SQI) showed no difference (P> 0,05). The results of sperm-pellucid zone binding showed differences between treatments (P <0,05), as in in vitro fertilization, however, the behavior of these changes does not indicate an association with the consumption of this type of water. The study shows that there are no strong or negative changes that show an effect on the fertility of the bull due to the consumption of treated production water.

The effects of the centrifugation associated to the use of two extenders on the viability of six-banded armadillo's (Euphractus sexcinctus) sperm were evaluated during a thermo resistance test (TRT). Semen samples (n=12) derived from 04 stud males collected by electroejaculation were divided in four aliquots; two of that were immediately diluted in Tris or powdered coconut water (ACP-119(r)); the two others were centrifuged (800g10min-1) prior to the dilution. Samples were incubated at 34ºC per 3h, and the semen parameters were evaluated at each hour. In general, dilution promoted a reduction in semen viscosity in the use of both diluents using centrifugation or not. At 60min, a decrease was verified for all semen parameters (P<0.05), however they were better preserved in the use of Tris when compared to ACP-119(r) (P<0.05) up to 120min. After that, both diluents equated. In addition, centrifugation procedure presented a deleterious effect on the armadillo's semen quality during all the thermoresistance test. In the present conditions, conclude that Tris extender is more efficient than ACP-119(r) for the preservation of six-banded armadillo semen viability, and the previous centrifugation is unnecessary. | Foram avaliados os efeitos da centrifugação associada ao uso de dois diluentes na manutenção da viabilidade espermática em tatus-peba (Euphractus sexcinctus) ao longo do teste de termorresistência (TTR). Amostras de sêmen (n=12), oriundas de 04 machos adultos coletados por eletroejaculação, foram divididas em quatro alíquotas, sendo duas imediatamente diluídas em Tris ou água de coco em pó (ACP-119(r)), e as outras duas centrifugadas (800g10min-1) previamente à diluição. As amostras foram incubadas a 34°C por 3h, e os parâmetros seminais avaliados em intervalos de 1h. Em termos gerais, verificou-se uma redução da viscosidade espermática imediata à diluição em ambos os diluentes, independente do uso da centrifugação. Aos 60 minutos, verificou-se uma redução dos parâmetros avaliados (P<0,05), embora o Tris tenha promovido uma melhor preservação deles (P<0,05), quando comparado ao ACP-119(r) até os 120 minutos de avaliação. Após este período, os dois diluentes se equipararam (P>0,05). Ainda, verificou-se um efeito deletério da centrifugação sobre a qualidade do sêmen de tatus-peba durante todo o teste de termorresistência. Nas condições do presente estudo, conclui-se que o diluente Tris mostrou-se superior ao ACP-119(r) para a manutenção da viabilidade do sêmen de tatus-peba, sendo desnecessária a realização de centrifugação prévia à diluição.

Foram utilizados vinte e quatro ejaculados de cinco diferentes cachaços na congelação de sêmen suíno, sendo doze deles pré-diluídos em água de coco in natura e em Merck I, utilizando a lactose como diluidor de refrigeração e de congelação (experimento A) e doze pré-diluídos apenas com Merck I. Após três diferentes pré-tratamentos, a água de coco in natura foi utilizada como diluidor de refrigeração e de congelação, sendo a lactose utilizada como controle (experimento B). Seguiu-se a metodologia convencional de congelação de sêmen desta espécie -Tierärztliche Hochschule Hannover (grupo 1A-1B) e um novo processo com longo período de equilíbrio (grupos 2A-2B e 3A-3B). A qualidade do sêmen descongelado foi avaliada pela motilidade subjetiva (SMOT), motilidade computadorizada (CMOT) e morfologia das células com borda apical normal (NAR), após fixação em formol citrato. As porcentagens de espermatozóides com NAR foram 65% (grupo 1A), 71% (grupo 2A) e 75% (grupo 3A) para o sêmen pré-diluído em água de coco e 60% (grupo 1A), 68% (grupo 2A) e 68% (grupo 3A) para aquele pré-diluído com Merck I (experimento A); e 56% (grupo 1B), 68% (grupo 2B) e 73% (grupo 3B) para o sêmen congelado em água de coco e 60% (grupo 1B), 68% (grupo 2B e 3B) para o sêmen congelado em lactose (experimento B). Não havendo, portanto, diferença estatística entre os dois pré-diluentes e os dois diluentes de refrigeração e de congelação (p<0,05). Concluiu-se, portanto, que 1) os pré-tratamentos com longo período de equilíbrio têm melhor efeito na proteção do acrossoma do espermatozóide suíno e para manter a motilidade espermática e 2) a água de coco como pré-diluente e diluente para refrigeração e de congelação é semelhante ao Merck I (experimento A) e a lactose (experimento B), sendo portanto indicado para pré-diluir e congelar sêmen suíno.

Compararam-se as características cinéticas e morfológicas de espermatozoides caprinos congelados nos meios à base de ACP-101® e TRIS. Os diluentes utilizados foram: ACP-101® (+ 2,5% gema ovo + 7% glicerol) e TRIS (+ 20% gema ovo + 6,8% glicerol). Quarenta e oito ejaculados de quatro bodes foram coletados, avaliados, divididos em duas alíquotas e diluídos nos meios ACP-101® e TRIS, respectivamente, posteriormente congelados e, após 30 dias, descongelados. A avaliação da motilidade espermática por computador foi realizada aos 5, 60 e 120 minutos pós-descongelação. As características de motilidade espermática analisadas foram: motilidade total (MT) (%) e progressiva (MP) (%), velocidades média do trajeto do espermatozoide (VAP) (µm/s) e linear (VSL) (µm/s) e população de espermatozoides rápidos (ER) (%). As avaliações de morfologia espermática quantificaram a porcentagem de espermatozoides normais (N) e as alterações da cabeça (AC), da peça intermediária (API) e do flagelo (AF), aos cinco e 120 minutos pós-descongelação. O diluente TRIS apresentou resultados cinéticos mais elevados que o ACP-101® aos 60 e 120 minutos pós-descongelação. As AC aos 120 minutos pós-descongelação foram mais altas nos espermatozoides congelados em ACP-101®. Conclui-se que o diluente TRIS promoveu maior viabilidade in vitro dos espermatozoides caprinos pós-descongelação. | The aim of the work was to compare kinetic and morphologic characteristics of goat sperm frozen in diluent media based on ACP-101® and TRIS. The employed diluents were: ACP-101® (+ 2.5% egg yolk + 7% glycerol) and TRIS (+ 20% egg yolk + 6.8% glycerol). Forty eight ejaculates from four bucks were collected, assessed and divided into two aliquots and diluted into the experimental treatments ACP-101® and TRIS. The samples were frozen and after 30 days, thawed. The computer assisted spermatic motility evaluations were placed into 5, 60 and 120 minutes post-thawing. The motion parameters assessed were: total motility (MT) (%), progressive motility (MP) (%), average path velocity (VAP) (µm/s), straight linear velocity (VSL) (µm/s), and population of rapid spermatozoa (ER) (%). The morphologic parameters: normal spermatozoa (N), head alteration (AC), intermediary piece alteration (API), tail alteration (AF) were evaluated at 5 and 120 min post-thawing. The media based on TRIS showed kinetic results significantly superior to ACP-101® at 60 and 120min. After 120min post-thawing the AC was higher in frozen sperm in media based on ACP-101®. The TRIS media promoted better goat spermatozoa in vitro viability post-thawing.

Foram utilizados vinte e quatro ejaculados de cinco diferentes cachaços na congelação de sêmen suíno, sendo doze deles pré-diluídos em água de coco in natura e em Merck I, utilizando a lactose como diluidor de refrigeração e de congelação (experimento A) e doze pré-diluídos apenas com Merck I. Após três diferentes pré-tratamentos, a água de coco in natura foi utilizada como diluidor de refrigeração e de congelação, sendo a lactose utilizada como controle (experimento B). Seguiu-se a metodologia convencional de congelação de sêmen desta espécie -Tierärztliche Hochschule Hannover (grupo 1A-1B) e um novo processo com longo período de equilíbrio (grupos 2A-2B e 3A-3B). A qualidade do sêmen descongelado foi avaliada pela motilidade subjetiva (SMOT), motilidade computadorizada (CMOT) e morfologia das células com borda apical normal (NAR), após fixação em formol citrato. As porcentagens de espermatozóides com NAR foram 65% (grupo 1A), 71% (grupo 2A) e 75% (grupo 3A) para o sêmen pré-diluído em água de coco e 60% (grupo 1A), 68% (grupo 2A) e 68% (grupo 3A) para aquele pré-diluído com Merck I (experimento A); e 56% (grupo 1B), 68% (grupo 2B) e 73% (grupo 3B) para o sêmen congelado em água de coco e 60% (grupo 1B), 68% (grupo 2B e 3B) para o sêmen congelado em lactose (experimento B). Não havendo, portanto, diferença estatística entre os dois pré-diluentes e os dois diluentes de refrigeração e de congelação (p&lt;0,05). Concluiu-se, portanto, que 1) os pré-tratamentos com longo período de equilíbrio têm melhor efeito na proteção do acrossoma do espermatozóide suíno e para manter a motilidade espermática e 2) a água de coco como pré-diluente e diluente para refrigeração e de congelação é semelhante ao Merck I (experimento A) e a lactose (experimento B), sendo portanto indicado para pré-diluir e congelar sêmen suíno. | Twenty-four ejaculates were collected from five boars for the conventional freezing procedure at the Veterinary School of Hannover (group 1A-1B) and for an extended holding time procedure (group 2A-2B and 3A-3B). The semen were prediluted in two different diluents, coconut water in natura and Merck I medium before freezing (experiment A) and prediluted only with Merck I, but cooling and freezing with coconut water in natura or lactose (experiment B). The semen were arranged into three groups according to the different holding periods before freezing, group 1A-1B (sperm-rich phase, preserved for 4 hours by 15°C), group 2A-2B (sperm-rich phase, preserved for 16 hours by 18°C) and group 3A-3B (total semen, preserved for 16 hours by 18ºC). The quality of the thawed boar spermatozoa was evaluated by subjective motility (SMOT), computerassisted motility (Cell Motion Analyser, Strömberg-Mica - CMOT) and morphology of acrosomal ridges (NAR) after fixation in formol citrate. The acrosomal integrity (NAR) was 65% (group 1A), 71% (group 2A) and 75% (group 3A) for semen prediluted with coconut water and 60% (group 1A), 68% (group 2A) and 68% (group 3A) for semen prediluted with Merck I medium, respectively (experiment A); and 56% (group 1B), 68% (group 2B) and 73% (group 3B) for semen freezing with coconut water diluent, and 60% group 1B), 68% (group 2B and 3B) for semen freezing with lactose (experiment B). Thus, did not differ significantly (p&lt;0.05) between both pre-diluents and both freezing diluents. However, the post thaw motility by both SMOT and CMOT and the acrosome integrity (NAR) were significantly higher (p&lt;0.05) in the semen preserved for extended holding time (group 2A-2B and 3A-3B) than those for short time (group 1A-1B). It is concluded that the extended holding time has a better effect to protect acrosome of boar spermatozoa and also maintain sperm motility. Therefore, preserving boar semen for longer period before freezing is indicated for subsequent research on in vitro research with boar semen. And because the results using coconut prediluent and diluent were similar to that using Merck I medium (experiment A) and using lactose (experiment B), it is also indicated to use coconut for diluent and for freezing boar semen.