Bovine viral leukosis (BVL) is a disease with a high morbidity and low mortality. There are reports of natural infection in some bovine species, but it has been little studied in buffaloes. In Colombia, buffalo production is growing rapidly, and, so far, there are no reports of the disease. The objective of this study was to characterize buffalo production in the coffee-growing region and to determine, by PCR, the prevalence of BVL in buffaloes, as well as its presence in humans, cattle, and sheep near the coffee-growing region. Blood samples from 140 buffaloes and 10 buffalo milk samples were collected, and so were 58 samples from bovines, 35 samples from sheep, and 9 samples from humans that had been in contact with buffaloes. Hematological analyses were performed. Subsequently, DNA was extracted for PCR evaluation. Production information was gathered, and the results were processed and analyzed using the R software. The majority of animals were Mediterranean breed females, with a birth weight of 33.39 kg, a weaning weight of 202.93 kg, a calving interval of 491.77 d, a time to peak of 67.26 d, and 381.59 L of milk (adjusted to 305 d at two teats). A prevalence of 33.6 % and of 3.4 %, respectively, was detected in buffaloes and in bovines; no milk, sheep or human samples were positive. No risk factors associated with the infection were found; neither were significant alterations of the blood count or factors of production. These results constitute the first molecular report of the bovine leucosis virus (BLV) in the Americas and one of the first in the world. | La leucosis viral bovina (LVB) es una enfermedad de alta morbilidad y baja mortalidad. Existen reportes de la infección natural en algunas especies de bóvidos; sin embargo, en búfalos es poco estudiado. En Colombia la producción de búfalos crece rápidamente y hasta el momento no hay reportes de la enfermedad. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la producción bufalina en el eje cafetero y determinar la prevalencia de LVB por PCR en búfalos y la presencia en humanos, bovinos y ovejas en cercanías. Se tomaron muestras de sangre de 140 búfalos, 10 de leche de búfala y 58 muestras de bovinos, 35 de ovejas y 9 de humanos en contacto con los búfalos. Se realizaron análisis hematológicos. Posteriormente, extracción de ADN para evaluación por PCR. Se recolectó información productiva y los resultados fueron procesados y analizados mediante el software R. La mayoría de animales fueron hembras de la raza mediterránea, con peso al nacimiento de 33.39 kg, peso al destete 202.93 kg, intervalo entre partos 491.77 días, tiempo al pico 67.26 días y 381.59 L de leche (ajustada a 305 días a dos tetas). Se encontró una prevalencia de 33.6 % en búfalos y 3.4 % en bovinos; ninguna muestra de leche, oveja o humano resultó positiva. No se encontraron factores de riesgo asociados a la infección, ni una alteración significativa del cuadro hemático, ni de los factores productivos. Estos resultados se constituyen en el primer reporte molecular del VLB en América y una de las primeras en el mundo.