<p class="Default">The high susceptibility of sperm to the oxidative stress occurs especially due to high content of poly-unsaturated fattyacids (PUFAs) in its plasma membrane. The PUFAs provide the necessary fluidity to the plasma membrane. Howeverdouble bonds present in those fatty acids are more susceptible to oxidative stress. Studies in human indicate thatcryopreservation may lead to damages to the sperm due to oxidative stress. This study aimed to verify if the antioxidantglutathione (GSH) may protect ovine cryopreserved sperm against damages caused by oxidative stress. Semen samplesof four rams were cryopreserved using Tris-egg yolk extender supplemented with different concentrations of reducedglutathione (control, 1, 5 and 10 mM). After thawing, samples were evaluated using conventional (motility and vigor)and functional tests (membrane integrity and mitochondrial activity). Aliquots of each thawed sample were submitted toprotocol of induced lipid peroxidation using ascorbate (20 mM) and ferrous sulphate (4 mM), with further measurementof tiobarbituric acid reactive substances (TBARS), index of oxidative stress. No effect of GSH was observed on variablesassessed by conventional tests. GSH decreased the proportion of intact acrosomes. Samples treated with 5 mM GSHshowed lower percentage of intact membrane cells when compared to control samples and those treated with 10 mM.The percentage of cells with mitochondrial activity was affected by GSH, but no effect on TBARS. Samples from controlgroup were more susceptible to denaturation of chromatin. In conclusion, the addition of Glutathione (GSH) offersprotection to DNA and mitochondrial activity of ovine sperm.</p> | Os ácidos graxos poli-insaturados garantem fluidez à membrana plasmática do espermatozoide. No entanto, as duplas ligações presentes, os tornam mais susceptíveis aos efeitos nocivos da peroxidação lipídica. A adição do antioxidante Glutationa reduzida (GSH) poderia conferir proteção aos espermatozoides de ovinos submetidos à congelação contra os graves danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo do presente experimento foi avaliar se a GSH protege os espermatozoides ovinos criopreservados contra danos causados pelo estresse oxidativo. Foram colhidos ejaculados de quatro carneiros adultos. As análises convencionais foram: concentração, motilidade, vigor e morfologia. As análises funcionais foram: integridade de membrana, integridade acrossomal, integridade de cromatina e atividade mitocondrial. O sêmen foi criopreservado utilizando o diluidor Tris-gema-critrato, suplementado com GSH (controle, 1, 5 e 10 mM). As amostras foram submetidas ao protocolo de peroxidação lipídica induzida e subsequente quantificação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Sistema SAS para Windows. Não houve efeito do tratamento com GSH sobre as variáveis avaliadas pelos testes convencionais. A GSH diminuiu a proporção de acrossomas íntegros. Amostras tratadas com 5mM de GSH apresentaram menor percentual de células com membranas íntegras quando comparadas às amostras controle e aquelas tratadas com 10 mM; o percentual de células sem atividade mitocondrial foi influenciado pela GSH e também não houve efeito nas TBARS. As amostras do grupo controle foram mais susceptíveis à denaturação da cromatina. Em conclusão, a adição do antioxidante Glutationa reduzida confere proteção ao DNA e à atividade mitocondrial de espermatozoides de ovinos.

O objetivo do presente estudo foi avaliar se a composição proteica de plasma seminal, verificada por eletroforese bidimensional (2DE), pode interferir na congelabilidade do sêmen de touros, e se existe a possibilidade de predizer tal característica em touros doadores de sêmen. Amostras de 20 touros (diferentes raças) com mínimo de três anos de histórico de produção em Central de Coleta de sêmen foram coletadas. Todos os touros tinham de 2 a 7 anos de idade. A congelabilidade do sêmen foi calculada por no de ejaculados aprovados pós-descongelação / no de ejaculados submetidos à congelação (depois do crivo do padrão de qualidade da empresa para aprovar o ejaculado para ser submetido a congelação). Os touros foram divididos em três grupos: ALTA (=&gt;80% aproveitamento de ejaculados encaminhados à congelação); MÉDIA (&gt;60 a 79% ejaculados aprovados) e BAIXA (=&lt;59% ejaculados aprovados). Sessenta e oito corridas de géis 2DE foram avaliadas nas amostras de plasma seminal, que detectaram 225 spots com quantidade de proteína diferente entre as mesmas (VION). Pela estatística utilizada, comparando-se a congelabilidade do sêmen com quantidade de proteína detectada de cada spot (VION), constatou-se que 2 spots apresentaram-se com quantidade significativa de proteína diferente entre os dois grupos de congelabilidade do sêmen, considerando spots que foram detectados em mais de 75% das amostras corridas. Os touros taurinos apresentaram perfil proteico mais homogêneo quando comparado com os zebuínos, considerando número e frequência de spots. Tais resultados demonstram um potencial para uso da proteômica como ferramenta preditiva da congelabilidade do sêmen de touros, porém com necessidade de maiores estudos, principalmente para melhor compreensão de interações proteicas entre membrana espermática, plasma seminal e diluidores de sêmen utilizados, já que podem interferir no fenótipo proteico avaliado e na congelabilidade do sêmen, seja de forma positiva ou negativa. | The present study was undertaken the protein composition in 2D-electrophoretic pattern (2DE) of the seminal plasma (SP) can interfere in the semen bull freezability, and if we can use that for predicting semen bull freezability. Samples were obtained of 20 bulls (different breeds) with a minimum of 3 years history semen production in commercial semen collection Center. All animals ranged between 2 - 7 years of age. The semen freezability was calculated by # of thawed and approved ejaculates / # of ejaculates submitted to cryopreservation (after semen evaluation and approved to submitted to freeze). The bulls were divided in 3 groups: HIGH (=&gt;80% ejaculates approved); MEDIUM (&gt;60% and &lt;79% ejaculates approved); LOW (=&lt;59% ejaculates approved); the pattern and criteria were the same used in the routine of the commercial semen Center. 68 gels were carried through by 2DE of SP samples indicated 225 detected spots with protein different amount (VION) comparing. Comparing bull´s semen freezability and VION of each spot found difference among 2 spots from High and Low, even considering just spots with % of detection frequency bigger than 75%. The taurine bulls demonstrated more homogeneous profile when comparing with zebu bulls, considering number and frequency of appearance of spots. The results showed that proteomics can be a useful tool to predict the semen freezability, but we´ll need to study better the interactions between sperm membrane, seminal plasma and extender to comprehend better which proteome phenotype interfere positive or negatively in the semen freezability.

<p>This work studied the surgical technique for collecting embryos in the goat, using heterozygous donors for the 5/15 translocation, which were bred with translocated animals. At the same, time technical characteristics related to cryopreservation, thawing and cultivation of the structures were performed. Considering the superovulatory treatment, oestrus was observer 24 or 48 hours after removing the intravaginal sponge and 71 viable structures were yielded in 43 collections. The 1 -2 Propanediol proved to be an efficient cryoprotectant agent, and allowed the cultivation of all the embryos. This result was not observed when glycerol was used as a cryoprotectant agent. Adhesions due to multiple collections constitute a great challenge for the improvement of this technique, since they are considered a limiting factor to the use of donors in the beginning of their reproductive lives.</p> | <p>No presente trabalho foi realizado um estudo da técnica cirúrgica de coleta de embriões na espécie caprina, utilizando-se doadoras heterozigotas para a translocação 5/15, acasaladas com animal translocado. Simultaneamente foram observados aspectos técnicos inerentes à criopreservação, descongelação e cultivo das estruturas recuperadas. Frente ao tratamento superovulatório, o cio foi observado em 24 ou 48 horas após a remoção da esponja intravaginal e foram recuperadas 71 estruturas viáveis em 43 coletas. O 1 -2 Propanodiol mostrou-se eficiente criopreservador, permitindo cultivo de todos os embriões, fato não observado quando utilizou-se o Glicerol. As aderências provocadas pelas repetidas coletas constituem-se no grande desafio no sentido de se aperfeiçoar a técnica, pois são consideradas um fator limitante ao uso de doadores no início da vida reprodutiva.</p>

The aim of this paper was verifying the effect of the Equex STM Paste and EDTA addition to a Tris-egg yolk extender, on the post-thaw goat sperm viability. Nine semen samples of two adult goats were collected by artificial vagina and cryopreserved. It was also objective of this study, to evaluate the utilization of a soybean lecithin based commercial extender (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, French) for the goat semen freezing. They were formed five experimental groups: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EDTA+EQUEX e Bioexcell. After evaluation, the semen was diluted in the five extenders and packed in 0.25mL straws with 100 million of motile spermatozoa. The samples were cooled at 0,46°C/min to 5°C, submitted at 75min of equilibration time and frozen in liquid nitrogen vapour. The thawing was accomplished in 37ºC water bath for 50s. There were no differences (P&gt;;0,05) on the means of post-thaw total and progressive sperm motility among the groups TRIS, TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA. The Bioexcell group obtained the least (P&lt;0,05) percentage of post-thawing total and progressive sperm motility. After the thermotolerance test, it was observed the greatest (P&lt;0,05) rates of total and progressive sperm motility in the Equex STM groups (TRIS+EQUEX and TRIS+EQUEX+EDTA). Thus, it can be affirmed that the Equex addition promotes better maintenance rates in the pos-thaw sperm viability, when compared with the extenders that did not contain it. | Nove amostras de sêmen de dois caprinos adultos, colhidas com a utilização de vagina artificial, foram submetidas a criopreservação, com o objetivo de verificar o efeito do Equex STM Paste e do EDTA, adicionados a um diluidor a base de Tris-gema de ovo, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. Também foi objetivo desse trabalho, avaliar a utilização de um diluidor comercial, a base de lecitina de soja (Bioexcell® - IMV, L'Aigle, França), para a congelação do sêmen caprino. Assim, foram formados cinco grupos experimentais: TRIS; TRIS+EDTA; TRIS+EQUEX; TRIS+EQUEX+EDTA e Bioexcell. Logo depois da avaliação, o sêmen foi diluído nos diferentes meios e envasado em palhetas de 0,25 mL, com dose inseminante de 100 x 10(6) espermatozóides. As amostras foram submetidas ao resfriamento, com uma curva média de 0,46°C/min, até atingirem a temperatura de 5°C, mantidas por mais 75min em tempo de equilíbrio e, posteriormente, congeladas em nitrogênio líquido. A descongelação foi realizada em banho-maria a 37ºC por 50s. Não houve diferença (P&gt;;0,05) entre as médias de motilidade total e progressiva, em relação aos grupos TRIS, TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA. O grupo Bioexcell obteve o menor (P&lt;0,05) percentual de espermatozóides com motilidade total e progressiva após a descongelação. Após o teste de termoresistência, as melhores (P&lt;0,05) taxas de motilidade total e progressiva foram observadas para os grupos com Equex STM (TRIS+EQUEX e TRIS+EQUEX+EDTA). Assim, pode-se afirmar que a adição do Equex promove uma maior manutenção das taxas de viabilidade espermática após a descongelação, quando comparado com os diluidores que não o continham.

The present study compared powder coconut water (ACP®) and Tris extenders on canine semen cryopreservation by classic evaluation and thermoresistance test. Five stud dogs were submitted to two semen collections by digital manipulation. Sperm fractions were analyzed regarding to its color, volume, sperm concentration, motility, vigor and morphology. Semen samples were divided into two aliquots: the first one was extended in Tris and second one in ACP®. Both extenders contained 20% egg yolk. Samples were cooled to 5ºC, glycerol added (6%), packaged in 0.25mL straws, frozen in nitrogen vapors and finally stored in liquid nitrogen. One week later, thaw was performed at 38ºC per 1min in water bath and new evaluations of sperm motility, vigor and morphology were conducted. Samples were kept at 38ºC in water bath and evaluated at 15 and 30min after thaw. No significant difference was observed between extenders throughout cryopreservation or thawing procedures, as well as during thermoresistance test, concerning to characteristics evaluated. Tris and ACP® were efficient in conserving 50% mobile spermatozoa and 70% morphologically normal sperm after thaw. Thus, ACP® can be used as an alternative extender for canine semen cryopreservation. | O presente trabalho comparou a água de coco em pó (ACP®) com o diluidor Tris na criopreservação do sêmen canino através da avaliação clássica e do teste de termorresistência. Cinco reprodutores caninos foram submetidos a duas coletas de sêmen através de manipulação digital. As frações espermáticas foram avaliadas quanto à sua coloração, volume, concentração, motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras de sêmen foram divididas em duas alíquotas: a primeira foi diluída em Tris e a segunda em ACP®. Ambos os diluidores continham 20% de gema de ovo. As amostras foram refrigeradas, adicionadas de glicerol (6%), envasadas em palhetas de 0,25mL, criopreservadas em vapores de nitrogênio, e finalmente armazenadas em nitrogênio líquido. Após uma semana, foi realizada a descongelação a 38ºC por 1min em banho-maria, sendo realizadas novas avaliações de motilidade, vigor e morfologia espermática. As amostras foram mantidas a 38ºC no banho-maria e avaliadas aos 15 e 30 min após descongelação. Não foram observadas diferenças significativas entre os dois diluidores no decorrer dos procedimentos de criopreservação e descongelação, bem como durante o teste de termorresistência, em relação às características avaliadas. O Tris e o ACP® foram eficientes em conservar 50% de espermatozóides móveis e 70% de espermatozóides morfologicamente normais após a descongelação. Assim, o ACP® pode ser utilizado como diluidor alternativo para a criopreservação do sêmen canino.

Compacted mouse morulae were frozen at 0.3ºC/min. or 0.5ºC/min. from -6ºC to -24ºC or -32ºC in 10% of glycerol plus different sucrose concentrations with or without 0.1% of honeybee royal jelly. Embryos were thawed in water bath at 22ºC for 20 seconds and cryoprotectant dilution was done in three steps. Embryos were cultured in Whitten’s medium for 24, 48 and 72 hours at 37ºC, 5% of CO2 and 100% of humidity. The in vitro development ranged from 56.6% to 100% after 72 hours. Expanded blastocysts were transferred to pseudopregnant recipients on the third day of the estrous cycle. Viable fetuses rates for embryos frozen to -24 or -32ºC at 0.3ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose, 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly, 10% glycerol + 0.1% honeybee royal jelly or 10% glycerol were respectively: 28.1% and 13.6%, 48.7% and 31.9%, 28.6% and 13.2%, 20.0% and 42.4%. Viable fetuses for embryos frozen to -24ºC or -32ºC at 0.5ºC/minute in 10% glycerol + 10% sucrose or 10% glycerol + 10% sucrose + 0.1% honeybee royal jelly were respectively 29.0% and 15.3%, 48.8% and 32.0%. We can conclude that addition of 10% sucrose to 10% glycerol was efficient for embryo freezing at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitrogen at -24ºC. The honeybee royal jelly addition provided higher viable fetuses rates when embryos were cooled at 0.3 or 0.5ºC/minute and plunged in liquid nitrogen at -24ºC. | Embriões de camundongos foram congelados em 10% de glicerol adicionado de várias concentrações de sacarose e/ou 0,1% de geléia real, nas velocidades de 0,3ºC ou 0,5ºC/minuto até -24ºC ou -32ºC e descongelados em água a 22ºC durante 20 segundos. A diluição dos crioprotetores foi realizada em três etapas e o cultivo dos embriões no meio de Whitten em estufa com 5% de CO2, 100% de umidade e 37ºC por 72 horas. O desenvolvimento in vitro até blastocisto variou entre 56,6% e 93,4%, mostrando que 10% de sacarose + 10% de glicerol foi eficiente na congelação. Blastocistos expandidos oriundos de embriões congelados até -24 ou -32ºC à velocidade de 0,3ºC/minuto em soluções contendo 10% de glicerol + 10% de sacarose; 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real; 10% de glicerol + 0,1% de geléia real ou 10% de glicerol, transferidos para receptoras pseudoprenhes, apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 28,1% e 13,6%, 48,7% e 31,9%, 28,6% e 13,2%, 20,0% e 42,4%. Embriões congelados até -24ºC ou -32ºC a 0,5ºC/minuto nas soluções de 10% de glicerol + 10% de sacarose ou 10% de glicerol + 10% de sacarose + 0,1% de geléia real apresentaram, respectivamente, taxas de fetos viáveis de 29,0% e 15,3%, 48,8% e 32,0%. Adição de sacarose e de geléia real ao meio de congelação contendo 10% de glicerol proporcionou maiores taxas de fetos viáveis a 0,3ºC e 0,5ºC/minuto e imersão em nitrogênio líquido a -24ºC.

The aim of this study was to evaluate isolated sheep preantral follicles (PF) after exposure and cryopreservation using glycerol (GLI), ethylene glycol (EG), propanediol (PROH) or dimethyl sulfoxide (DMSO) at 1.5 and 3.0 M. Each ovarian pair from 5 mixed breed adult sheeps was obtained at a local slaughterhouse and submited to follicular isolation. From the obtained suspension, one aliquot was immediately analysed with trypan blue. The remaining suspension was divided in 16 aliquots of 0.9 mL, suspended in (v/v) in MEM+ with EG, DMSO, GLI or PROH at 1.5 or 3.0 M to the toxicity test and cryopreservation. After the end of each treatment, the follicular viability was analysed and the PF were classified as viable if not dyed or not viable if dyed with trypan blue. The analysis of the results showed that after the toxicity test and cryopreservation, using all cryoprotectants and at both concentrations, the percentage of viable PF was significantly reduced when compared to the control. At the toxicity test, when the cryoprotectants were compared at the same concentrations, the lowest percentage of viable preantral follicles was obtained when 3.0 M PROH (38,9%) was used, being, more toxic when compared to the others cryoprotectants. After cryopreservation, significantly higher percentual of viable PF was observed when the EG and DMSO were used. In conclusion, sheep PF can be cryopreserved successfully using DMSO and EG at 1.5 and 3.0 M. | O objetivo deste estudo foi avaliar folículos pré-antrais (FOPA) ovinos isolados após sua exposição e criopreservação utilizando glicerol (GLI), etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) a 1,5 e 3,0 M. Cada par ovariano de 5 ovelhas sem raça definida foi coletado em abatedouro local e submetido ao isolamento folicular. Da suspensão obtida, uma alíquota foi imediatamente destinada à análise da viabilidade folicular com o auxílio do corante vital azul de trypan. O restante da suspensão foi dividida em 16 alíquotas de 0,9 mL, suspensas (v/v) em MEM+ com EG, DMSO, GLI ou PROH a 1,5 ou 3,0 M, para teste de toxicidade e criopreservação. Após o término de cada tratamento, a viabilidade folicular foi analisada e os FOPA considerados viáveis se não corados ou não viáveis, quando corados. A análise dos dados mostrou que após o teste de toxicidade e criopreservação, em todos os crioprotetores e em ambas as concentrações, a percentagem de FOPA viáveis foi significativamente reduzida quando comparada ao controle. No teste de toxicidade, quando os crioprotetores foram comparados entre si nas mesmas concentrações, foram observadas percentagens significativamente menores de FOPA viáveis no PROH 3,0 M (38,9%), apresentando-se, portanto, mais tóxico quando comparado aos demais crioprotetores. Após criopreservação, obteve-se percentagens significativamente maiores de folículos pré-antrais viáveis quando o EG e o DMSO foram utilizados. Em conclusão, FOPA ovinos isolados podem ser criopreservados com sucesso utilizando-se DMSO e EG a 1,5 e 3,0 M.

The aim of this study was to evaluate the dilution of cryoprotectant in 2 or steps of bovine in vitro-produced embryos after quick-freezing. A total of 1329 expanded blastocyst were kept in co-culture as control group or cryopreserved by 3 quick-freezing protocols. The embryos were exposed to 10% EG for 10 minutes then to 17%, 22% or 28% for 30 seconds. After loading, the straws were held in nitrogen vapor for 2 minutes and then plunged and stored in liquid nitrogen. After warming, cryoprotectants were diluted in two steps using 0.3 M sucrose and isotonic solution, or three steps using 0.3 M sucrose + 10% EG then 0.3 M sucrose and isotonic solution. Embryos were co-cultured on a granulosa cell monolayer and evaluated after 24 hours for re-expansion and at 24, 48, 72 and 96 hours of co-culture for hatching rates. The in vitro survival rates of embryos cryopreserved by the quick-freezing method and two-step cryoprotectant dilution were 1.94; 11.88 and 6.06%, for EG 17, EG22 and EG28 groups, respectively. At the three step dilution, the in vitro survival rates were 4.67; 9.90 and 10.78% for EG 17, EG22 and EG28 groups, respectively. | O objetivo deste trabalho foi estudar a remoção do crioprotetor, em duas ou três etapas, em embriões bovinos produzidos in vitro após a congelação em vapor de Nirtogênio. Blastocistos expandidos (1329) foram mantidos em co-cultivo (controle) ou criopreservados em 3 protocolos de congelação em vapor de nitrogênio. Os embriões foram equilibrados na solução de 10% de EG por 10 minutos e em 17%, 22% ou 28% de EG por 30 segundos. Após o envase, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio por 2 minutos e armazenadas em nitrogênio líquido. Após a descongelação, os crioprotetores foram diluídos em duas etapas, usando 0,3M de sacarose e solução isotônica ou em três etapas usando 0,3M de sacarose + 10% de EG; 0,3M de sacarose e solução isotônica. Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa, avaliando as taxas de re-expansão após 24 horas e de eclosão após 24, 48, 72 e 96 horas. Para os grupos congelados no vapor e diluição do crioprotetor em duas etapas, as taxas de eclosão foram de 1,94; 11,88 e 6,06% para EG17, EG22 e EG28, respectivamente. Já para os grupos com diluição do crioprotetor em três etapas, as taxas de eclosão foram de 4,67; 9,90 e 10,78% para EG17, EG22 e EG28, respectivamente.

To verify the effect of three different extenders and two thawing temperatures on frozen-thawed canine sperm characteristics, one ejaculate from nine dogs were separately collected and processed (n=9). Each ejaculate was divided into 3 equal samples and centrifuged. The pellets were re-suspended using: 1st pellet - Glicyne-egg yolk extender (GEY), 2nd pellet - TRIS extender and 3rd pellet - M9 extender and all samples were filled in 0.5ml straws. A total of 84 straws (28 for each protocol) were done. The sperm motility, vigour and plasma membrane integrity from each protocol were immediately evaluated (M1) and the straws were brought to a refrigerator at 5ºC for 60 minutes. After that, a sample from each protocol was warmed up in a water bath 37ºC for 5 min. and sperm motility, vigour and plasma membrane integrity were evaluated (M2). The straws were frozen in liquid nitrogen. One straw from each protocol was thawed at 37ºC for 30 sec and another at 72ºC for 8 sec and the sperm motility; vigour, CASA and plasmatic membrane integrity and acrossomal status using FITC-PNA stain were evaluated (M3). Plasma membrane, sperm motility and vigour were evaluated after a 1-hour incubation at 37ºC (M4). Statistical analysis showed that the higher temperature had positive effect on froze-thawed canine sperm characteristics. The best results were taken when canine semen was frozen in GEY extender and thawed 72ºC for 8 sec. | Com objetivo de avaliar o efeito de dois protocolos de descongelação do sêmen canino congelado em três diluidores foram coletados ejaculados de nove cães. Cada ejaculado foi dividido em 3 amostras, centrifugado e os pellets tratados sob diferentes protocolos: 1º - meio á base de glicina e gema de ovo; 2º - meio á base de TRIS e 3º - meio M9. Foram envasadas 28 palhetas de 0,5ml segundo cada protocolo. Amostras tratadas sob cada protocolo foram avaliadas (M1) quanto a motilidade, vigor e integridade das membranas. As palhetas foram refrigeradas a 5ºC por 60 min. e congeladas em N2. Uma amostra de cada protocolo foi avaliada quanto: motilidade, vigor e integridade das membranas após o equilíbrio (M2). Eram sempre descongeladas três pares de palhetas, sendo que cada par havia sido congelado sob um mesmo protocolo. Uma das palhetas de cada par era descongelada a 37ºC por 30 segundos e outra a 72ºC por 8 segundos. Cada grupo foi avaliado após o descongelamento (M3) quanto a motilidade e vigor espermático, avaliação computadorizada do movimento, integridade das membranas e avaliação acrossomal por meio de Fitc-PNA e PI. As amostras foram mantidas em banho Maria a 37ºC por 1h para o teste de longevidade espermática e reavaliadas (M4) quanto à motilidade e vigor espermáticos, integridade das membranas. Após análise estatística concluímos que as células espermáticas caninas descongeladas a 72ºC por 8 segundos apresentaram um maior somatório de bons resultados quanto aos testes de viabilidade espermática in vitro empregados.

Este trabalho avaliou o desenvolvimento in vitro e in vivo de mórulas de camundongos congeladas por diferentes métodos. A congelação lenta foi realizada em 1,5M de etileno glicol (EG) sendo os embriões resfriados a 0,5; 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto. Na vitrificação, as mórulas foram equilibradas por 3 minutos em 20% de EG e vitrificadas em solução contendo 40% de EG, 18% de ficol e 10,26% de sacarose após 60 segundos de exposição. A congelação rápida em vapor de nitrogênio foi realizada em solução contendo 3M de EG + 0,3M de sacarose após 2 ou 5 minutos de exposição. Os embriões dos três métodos foram descongelados pela exposição das palhetas ao ar por 10 segundos e imersão em água a 25ºC por 20 segundos. Todos os embriões descongelados foram cultivados in vitro por 72 horas para avaliação da sobrevivência in vitro. Para avaliação da sobrevivência in vivo, mórulas congeladas e não congeladas (controle) foram transferidas para receptoras. O desenvolvimento in vitro nas velocidades de 0,5; 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto foi, respectivamente, 72,3; 79,6; 76,5 e 84,8%. Não houve diferença estatística entre as velocidades de 0,7; 1,0 e 1,2ºC/minuto (p &gt;; 0,01). O desenvolvimento in vitro das mórulas congeladas por vitrificação e pelo método rápido (84,5 e 74,3%, respectivamente) foi semelhante ao método lento. In vivo, a taxa de implantação e o número de fetos vivos não diferiram estatisticamente entre os grupos lento a 1,2ºC/minute, vitrificação e rápido. | The in vitro and in vivo development of mouse morulae after cryopreservation through different methods was examined. The slow-freezing involved an equilibration in 1.5M ethylene glycol (EG) and cooled at 0.5; 0.7; 1.0 or 1.2ºC/minute. The vitrification involved a 3 minutes equilibration in 20% EG and 60 seconds in solution containing 40% EG, 18% ficoll and 10.26% sucrose. The quick-freezing involved an equilibration in 3M EG + 0.3M sucrose for 5 minutes and 2 minutes in nitrogen vapor. In all three methods the straws were thawed in air for 10 seconds and in water at 25ºC for 20 seconds and the embryos cultured in vitro for 72 hours to estimate blastocyst rate. To assess viability in vivo, frozen morulae as well as fresh embryos were transferred into recipients. The in vitro development rates with 0.5, 0.7; 1.0 and 1.2ºC/minute were, respectively, 72.3; 79.6; 76.5 and 84.8%. There was no significant difference among the cooling rates of 0.7; 1.0 and 1.2ºC/minute (p &gt;; 0.01). The in vitro survival rates of vitrification and quick-freezing (84.5 and 74.3%, respectively) were similar to the slow-freezing. In vivo, the implantation rate and number of fetuses from embryos frozen through slow-freezing at 1.2ºC/minute, vitrification and quick-freezing were not significantly different.