Foram avaliados os efeitos do tempo sobre o metabolismo oxidativo e a fagocitose de Escherichia coli, em amostras de polimorfonucleares (PMN) do sangue, de cinco bezerros hígidos, conservadas em banho de gelo por duas (t2), quatro (t4), seis (t6), 12 (t12) e 24 (t24) horas. O metabolismo oxidativo foi avaliado utilizando o Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH-DA) e a E. coli, como estímulo. Para a fagocitose a mesma bactéria foi utilizada. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. O metabolismo oxidativo basal dos PMN do sangue de bezerros foi maior nos tempos t4, t6 e t12, do que em t2 (p<0,05). A intensidade de fluorescência do metabolismo oxidativo induzido pela bactéria foi maior nos tempos t4 e t6 do que em t2 (p<0,05). A comparação entre o metabolismo basal e induzido pela bactéria, em cada um dos tempos, mostrou que a maior diferença ocorreu em t2, com valores da média geométrica e desvios padrão respectivos de 18,3 ± 4,4 e 26,7 ± 1,8 (p< 0,05). A atividade de fagocitose, medida pela intensidade de fluorescência, foi maior para as amostras mantidas em gelo por 6 horas do que para t2, t4 e t12 (p<0,05). O percentual de fagocitose não diferiu entre os tempos. O tempo ideal para análise do metabolismo oxidativo foi o de duas horas. Maiores estudos são necessários para se verificar a influência do tempo de conservação na fagocitose de E. coli por PMN do sangue de bovinos.

O presente estudo teve por objetivo avaliar funcionalmente os macrófagos lácteos "nonelicited" presentes por meio de testes de fagocitose, espraiamento e liberação de peróxido de hidrogênio. Foram colhidas 56 amostras de leite de 15 búfalas hígidas e mensuradas a contagem de células somáticas total e diferencial, a viabilidade celular, os testes de fagocitose, de espraiamento e a liberação de peróxido de hidrogênio. Dessas variáveis obteve-se respectivamente média de 14.500 cél/mL de leite; com mediana de 4,33% de linfócitos e médias e desvios padrão de 50,77% + 18,28 de células da série monócito/macrófago e 32,13% + 19,27 de polimorfonucleares. A viabilidade das células na suspensão foi 66,8% +15,8 e os índices de fagocitose e espraiamento foram 30,1% + 16,9 e 58,5% +13,3. Não houve diferença entre a liberação de H2O2 espontânea e induzida por PMA. Concluiu-se que os macrófagos presentes no leite de búfalas hígidas e espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras. | The objective of the present study was to evaluate the functioning of nonelicited dairy macrophages present in phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release tests. Fifty-six samples of milk were collected from 15 healthy buffaloes. Total and differential somatic cell counts, cell viability, and indexes of phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release were assessed. The following values were obtained: mean of 14,500 cells/mL of milk, with median equal to 4.33% of lymphocytes; mean and standard deviation equal to 50.77% + 18.28 of monocytes / macrophages and 32.13% + 19.27 polymorphouclear cells. Mean viability of cells in suspension was 66.8% +15.8; phagocytosis and spreading indexes were equal to 30.1% + 16.9 and 58.5% +13.3, respectively. There was no difference between the spontaneous release of H2O2 and the one induced by PMA. It was concluded that nonelicited macrophages present in the milk of healthy buffaloes were significantly capable to spread and phagocyte. Phagocytes presented the ability to release hydrogen peroxide either spontaneously or not, in a maximum level and with a significant variation between samples.

O presente estudo teve por objetivo avaliar funcionalmente os macrófagos lácteos "nonelicited" presentes por meio de testes de fagocitose, espraiamento e liberação de peróxido de hidrogênio. Foram colhidas 56 amostras de leite de 15 búfalas hígidas e mensuradas a contagem de células somáticas total e diferencial, a viabilidade celular, os testes de fagocitose, de espraiamento e a liberação de peróxido de hidrogênio. Dessas variáveis obteve-se respectivamente média de 14.500 cél/mL de leite; com mediana de 4,33% de linfócitos e médias e desvios padrão de 50,77% + 18,28 de células da série monócito/macrófago e 32,13% + 19,27 de polimorfonucleares. A viabilidade das células na suspensão foi 66,8% +15,8 e os índices de fagocitose e espraiamento foram 30,1% + 16,9 e 58,5% +13,3. Não houve diferença entre a liberação de H2O2 espontânea e induzida por PMA. Concluiu-se que os macrófagos presentes no leite de búfalas hígidas e espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras.

Foram avaliados os efeitos do tempo sobre o metabolismo oxidativo e a fagocitose de Escherichia coli, em amostras de polimorfonucleares (PMN) do sangue, de cinco bezerros hígidos, conservadas em banho de gelo por duas (t2), quatro (t4), seis (t6), 12 (t12) e 24 (t24) horas. O metabolismo oxidativo foi avaliado utilizando o Diacetato 2' 7' Diclorofluoresceína (DCFH-DA) e a E. coli, como estímulo. Para a fagocitose a mesma bactéria foi utilizada. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. O metabolismo oxidativo basal dos PMN do sangue de bezerros foi maior nos tempos t4, t6 e t12, do que em t2 (p&lt;0,05). A intensidade de fluorescência do metabolismo oxidativo induzido pela bactéria foi maior nos tempos t4 e t6 do que em t2 (p&lt;0,05). A comparação entre o metabolismo basal e induzido pela bactéria, em cada um dos tempos, mostrou que a maior diferença ocorreu em t2, com valores da média geométrica e desvios padrão respectivos de 18,3 ± 4,4 e 26,7 ± 1,8 (p&lt; 0,05). A atividade de fagocitose, medida pela intensidade de fluorescência, foi maior para as amostras mantidas em gelo por 6 horas do que para t2, t4 e t12 (p&lt;0,05). O percentual de fagocitose não diferiu entre os tempos. O tempo ideal para análise do metabolismo oxidativo foi o de duas horas. Maiores estudos são necessários para se verificar a influência do tempo de conservação na fagocitose de E. coli por PMN do sangue de bovinos. | The time effect on oxidative burst and phagocytosis of Escherichia coli by polymorphonuclear leukocytes of 5 healthy calve blood samples were evaluated. Samples were kept on ice bath for two (t2), four (t4), six (t6), twelve (t12) and 24 hours (t24) before the tests. The oxidative burst was measured using the 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA) and E.coli as stimulus, also the same bacteria was used to phagocytosis process. The PMN basal oxidative burst of calves blood samples were analyzed by flow cytometry and were higher at times t4, t6 and t12 (p&lt;0,05) than at t2. The oxidative burst fluorescence intensity induced by bacteria was higher at the times t4 and t6 than at t2 (p&lt;0,05). The comparison between the basal oxidative burst and the one induced by bacteria on each time, showed t2 time as the one with the highest difference, with geometric media and standard deviation of 18,3 ± 4,4 and 26,7 ± 1,8 (p&lt; 0,05), respectively. Phagocytosis activity was measured by fluorescence intensity and was higher on samples kept on ice bath for 6 hours than those at t2, t4 and t12 (p&lt;0,05). The phagocytosis percentage did not differ between the different times. The ideal time to test the oxidative burst was 2 hours (t2). Further researches are necessary to verify the conservation time influence on E.coli phagocytosis by PMN of bovine blood.

O objetivo do presente trabalho foi o de investigar a influência da baixa temperatura ambiental sobre a atividade fagocítica de trombócitos de rã touro gigante (Rana catesbeiana). O modelo indutor de fagocitose utilizado foi a injeção de carvão coloidal no saco linfático dorsal. Os resultados alcançados mostraram que o frio foi capaz de modular significativamente a capacidade fagocítica dos trombócitos. Animais tratados e mantidos a 6°C exibiram uma lenta atividade inicial à 1h (16,3 ± 4,3; resultados expressos como média desvio padrão de trombócitos positivos em 400 células analisadas/animal; n=6), que aumentou discretamente às 6h e 12h (45,8 ± 12,2; 55,5 ± 9,6), alcançando o máximo de reação aos 3d e 7d (80,3 ± 27,5; 78,3 ± 29,5). Por outro lado, rãs mantidas a 24°C apresentaram uma forte resposta inicial à 1h (90,0 ± 16,7), aumentando marcadamente até 1d (196,0 ± 49,8), e então diminuindo até 7d (56,0 ± 10,6). Os resultados obtidos suportam estudos prévios que demonstram a importância da temperatura ambiental sobre múltiplos processos relativos aos mecanismos de defesa desses animais.

This study evaluated the phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa) by circulating leukocytes obtained from five Enzootic Bovine Leukosis (EBL)-negative cows, five naturally EBL-infected, non-lymphocytotic cows, and five EBL-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), analyzed by flow cytometry. Among cells obtained from EBL-infected cows, presenting PL, the percentage of leukocytes carrying out phagocytosis (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected (12.90%), and from BLV-infected, non-lymphocytotic cows (14.70%). Furthermore, leukocytes obtained from EBL-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence) than leukocytes obtained from non-infected and from EBL-infected, non-lymphocytotic, cows (p&lt;0.001). Therefore, results show a decreased phagocytic function among circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows. | Avaliou-se, por citometria de fluxo, a fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (IP), por leucócitos circulantes obtidos de cinco fêmeas bovinas negativas no sorodiagnóstico para a Leucose Enzoótica Bovina (LEB); de cinco fêmeas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP); e de cinco fêmeas infectadas, porém alinfocitóticas. Observou-se que, entre as amostras dos animais soronegativos, a porcentagem média de células realizando fagocitose (12,90%) não diferiu da observada entre as células dos animais alinfocitóticos (14,70%). Contudo, ambas foram maiores (p=0,047) que aquela verificada entre as células obtidas de animais manifestando LP (7,20%). Além disso, a intensidade média de fagocitose (caracterizada pela intensidade de fluorescência do IP, em valores arbitrários), verificada em leucócitos de animais manifestando LP (17,43) foi menor (p&lt;0,001) que a observada em leucócitos de animais alinfocitóticos (29,50), e que a observada em leucócitos de animais soronegativos (25,18), que não diferiram entre si. Assim, os resultados permitem-nos alvitrar que há alteração na função fagocítica de leucócitos circulantes em animais infectados pelo vírus da LEB, manifestando LP.

Avaliou-se, por citometria de fluxo, a fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (IP), por leucócitos circulantes obtidos de cinco fêmeas bovinas negativas no sorodiagnóstico para a Leucose Enzoótica Bovina (LEB); de cinco fêmeas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP); e de cinco fêmeas infectadas, porém alinfocitóticas. Observou-se que, entre as amostras dos animais soronegativos, a porcentagem média de células realizando fagocitose (12,90%) não diferiu da observada entre as células dos animais alinfocitóticos (14,70%). Contudo, ambas foram maiores (p=0,047) que aquela verificada entre as células obtidas de animais manifestando LP (7,20%). Além disso, a intensidade média de fagocitose (caracterizada pela intensidade de fluorescência do IP, em valores arbitrários), verificada em leucócitos de animais manifestando LP (17,43) foi menor (p<0,001) que a observada em leucócitos de animais alinfocitóticos (29,50), e que a observada em leucócitos de animais soronegativos (25,18), que não diferiram entre si. Assim, os resultados permitem-nos alvitrar que há alteração na função fagocítica de leucócitos circulantes em animais infectados pelo vírus da LEB, manifestando LP.

The intraperitoneal inoculation of 3.8 x 10(9) CFU of alive Salmonella typhimurium caused 100% mortality in rats. In these animals a small number of neutrophils migrated to the peritoneal cavity. The intraperitoneal inoculation of the animals with thioglycollate (Tg, 90 mg), carrageenin (Cg, 500 mu g), or killed S. typhimurium (KS, 1.9 x 10(9) CFU) 24 hours before challenge with alive S. typhimurium caused a significant neutrophil migration to the peritoneal cavity (determined 6 hours after challenge) and protected the animals against the lethal effect of the bacteria at a rate of 50%, 83% and 80%, respectively. However, similar treatment of the animals with brain heart infusion broth (BHI, S. typhimurium grout medium) protected the animals by only 23%. The migrating neutrophils in these animals represented less than 10% of those observed with other treatments. The phagocytosis activity was not associated with the survival rate as this activity was 2 times higher in the KS group than in the Tg and Cg groups, and the survival rate in this group was similar to that observed in Cg. These results suggest that the increase of neutrophil migration to the infectious site is an important factor associated with protection of the animals against the lethal effect of the bacterial infection. | A inoculação intraperitoneal de 3,8 x 10(9) CFU de Salmonella typhimurium viva causou 100% de mortalidade em ratos. Nesses animais, pequeno número de neutrófilos migraram para a cavidade peritoneal. A injeção intraperitoneal de tioglicolato (TG, 90 mg), carragenina (Cg, 500 mi g) ou salmonella morta pelo calor (KS, 1,9 x10(9) CFU) 24 horas antes do desafio com S. typhimurium viva causou maior (p &lt; 0,01) migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal após 6 horas e conferiu proteção aos animais contra os efeitos letais da bactéria que foram da ordem de 50%, 83% e 80%, respectivamente. Todavia, o tratamento semelhante dos animais com o meio de cultivo "infusão de cérebro e coração" (brain heart infusion-BHI) estéril exerceu proteção de apenas 23%. O número de neutrófilos que migraram para a cavidade peritoneal representou apenas 10% do verificado nos outros tratamentos. A atividade fagocitária não estava relacionada ao índice de sobrevivência dos animais, uma vez que tal atividade foi duas vezes maior no grupo KS do que nos grupos Tg e Cg, e a taxa de sobrevivência nesse grupo foi semelhante à observada no grupo Cg. Esses resultados sugerem que o aumento da migração de neutrófilos para o sítio infeccioso induzida pelas administrações prévias das diferentes substâncias é um importante fator associado com a proteção dos animais contra os efeitos letais da infecção bacteriana.

A inoculação intraperitoneal de 3,8 x 10(9) CFU de Salmonella typhimurium viva causou 100% de mortalidade em ratos. Nesses animais, pequeno número de neutrófilos migraram para a cavidade peritoneal. A injeção intraperitoneal de tioglicolato (TG, 90 mg), carragenina (Cg, 500 mi g) ou salmonella morta pelo calor (KS, 1,9 x10(9) CFU) 24 horas antes do desafio com S. typhimurium viva causou maior (p < 0,01) migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal após 6 horas e conferiu proteção aos animais contra os efeitos letais da bactéria que foram da ordem de 50%, 83% e 80%, respectivamente. Todavia, o tratamento semelhante dos animais com o meio de cultivo "infusão de cérebro e coração" (brain heart infusion-BHI) estéril exerceu proteção de apenas 23%. O número de neutrófilos que migraram para a cavidade peritoneal representou apenas 10% do verificado nos outros tratamentos. A atividade fagocitária não estava relacionada ao índice de sobrevivência dos animais, uma vez que tal atividade foi duas vezes maior no grupo KS do que nos grupos Tg e Cg, e a taxa de sobrevivência nesse grupo foi semelhante à observada no grupo Cg. Esses resultados sugerem que o aumento da migração de neutrófilos para o sítio infeccioso induzida pelas administrações prévias das diferentes substâncias é um importante fator associado com a proteção dos animais contra os efeitos letais da infecção bacteriana.

O objetivo do presente trabalho foi o de investigar a influência da baixa temperatura ambiental sobre a<br />atividade fagocítica de trombócitos de rã touro gigante (Rana catesbeiana). O modelo indutor de<br />fagocitose utilizado foi a injeção de carvão coloidal no saco linfático dorsal. Os resultados alcançados mostraram<br />que o frio foi capaz de modular significativamente a capacidade fagocítica dos trombócitos. Animais tratados e mantidos a 6°C exibiram uma lenta atividade inicial à 1h (16,3 ± 4,3; resultados expressos como média desvio padrão de trombócitos positivos em 400 células analisadas/animal; n=6), que aumentou discretamente às 6h e 12h (45,8 ± 12,2; 55,5 ± 9,6), alcançando o máximo de reação aos 3d e 7d (80,3 ± 27,5; 78,3 ± 29,5). Por outro lado, rãs mantidas a 24°C apresentaram uma forte resposta inicial à 1h (90,0 ± 16,7), aumentando marcadamente até 1d (196,0 ± 49,8), e então diminuindo até 7d (56,0 ± 10,6). Os resultados obtidos suportam estudos prévios que demonstram a importância da temperatura ambiental sobre múltiplos processos relativos aos mecanismos de defesa desses animais. | The influence of low environmental temperature on phagocytic activity of bullfrog (Rana catesbeiana) thrombocytes induced by the injection of colloidal carbon in the dorsal lymphatic sac was investigated. Results showed that low environmental temperature decreased the thrombocyte phagocytic activity. Thrombocytes of animals treated and kept at 6°C showed a slow initial activity at 1h (16.3 ± 4.3; results expressed as mean ± SEM of positive thrombocytes in 400 cell analysed/animal; n=6), which increased slightly at 6h and 12h (45.8 ± 12.2; 55.5 ± 9.6), reaching a maximum reaction at 3d and 7d (80.3 ± 27.5; 78.3 ± 29.5). In contrast, bullfrogs maintained at 24°C presented an initial high reaction at 1h (90.0 ± 16.7), increasing markedly until 1d (196.0 ± 49.8), and then decreasing until 7d (56.0 ± 10.6). These data corroborate previous studies which demonstrated the effects of environmental temperature on multiple factors related to the host’s protective mechanisms.