In this study ELISA was standardized for detecting antibodies against Hydropericardium Syndrome Virus. Factors like Antigen, Conjugate and incubation time were studied. Standardization was carried out by checker board titration method. Optimum incubation time for colour development was found to be 15 minutes while 50 mug/ml of antigen gave better results than 100 mug/ml. The conjugate dilution of 1:500 was observed to give satisfactory results as determined by regression analysis. Cut off value was determined by adding 2SDs and 3SDs in the mean optical density (OD) values of negative serum samples. It was found that mean OD+2SD (0.0684) resulted in better diagnostic sensitivity) and diagnostic specificity than mean OD+3SDs (0.0741).

Ultrasonography was perfomed in 88 ewes from Núcleo de Pesquisas Zootécnicas Sudoeste - Instituto de Zootecnia, São Paulo state, from march to may , 2001. Animals were examined from 19º to 33º days of pregnancy by transrectal ultrasonography in alternate days examinations, and by pregnancy detector for small ruminants (DPPR-80Ò) from 25º to 45º day. Positive diagnostic by transretal ultrasonography was obtained after yolk sac visualization. The embryo heartbeat was observed after 25 day of pregnancy. The positive diagnostic was obtained by pregnancy detector when embrionic heart was 160 to 200 beats/minute. Births confirmed the examinations. Three abortions ocurred during the experiment and these females were excluded from the group. From 85 ewes examined, 64 lambed. The transrectal ultrasonography accuracy in 19º day of pregnancy was 35,29%, with higher rate (82,53%) in 31º day. The doppler accuracy in 25º day was 24,71% and 34,12.00% in 45º day. Embryo heartbeat was detected by transrectal ultrasonography after 21 days of pregnancy and the first placentoms were observed after 25 days of pregnancy. In conclusion, transrectal ultrasonography was better than doppler in early pregnancy diagnosis in sheep. | No período de março a maio de 2001, foram realizados os exames ultra-sonográficos em 88 ovelhas do Núcleo de Pesquisas Zootécnicas Sudoeste - Instituto de Zootecnia. Os animais foram examinados entre o 19º e 33º dia de gestação pela ultra-sonografia transretal com exames executados em dias alternados, e do 25º ao 45º dia pelo detector de prenhez para pequenos ruminantes (DPPR-80Ò). O diagnóstico foi considerado positivo pela ultra-sonografia transretal por meio da visualização do saco gestacional e embrião. Após o 25º dia de gestação foi observado também o batimento cardíaco embrionário, cuja freqüência é de 160 a 200 batimentos por minuto. Esta observação foi dada como diagnóstico de gestação. Os nascimentos confirmaram os resultados dos exames. Dentre 88 fêmeas acasaladas, 3 abortaram durante o experimento e foram retiradas do grupo. Das 85 fêmeas restantes, 64 pariram. O diagnóstico de prenhez por meio da ultra-sonografia transretal apresentou 35,29% de acurácia no 19º dia de gestação, culminando em 82,35.00% no 31º dia de gestação. Pelo detector de prenhez, a acurácia foi de 24,71% no 25º dia de gestação e 34,12.00% no 45º dia. Foi possível visualizar os batimentos cardíacos do embrião pela ultra-sonografia transretal à partir do 21º dia de gestação e os primeiros placentomas foram observados ao redor do 25º dia de gestação. A ultra-sonografia transretal mostrou-se um método superior ao detector de prenhez para pequenos ruminantes, para diagnóstico precoce de gestação em ovelhas.

O objetivo desse trabalho foi o de padronizar uma técnica de reação em cadeia pela polimerase, nested PCR, para detectar Toxoplasma gondii em tecidos de suínos infectados experimentalmente e comparar os resultados obtidos com a técnica padrão de isolamento, o bioensaio em camundongos Para testar a técnica padronizada, foram inoculados, oralmente, oito suínos com quatro meses de idade, com 5x10(4) oocistos de Toxoplasma gondii (cepa AS-28) e três suínos com a mesma idade, não infectados, foram mantidos como controles. Todos os animais foram sacrificados 47 dias após a infecção e colheu-se amostras de cérebro, coração, língua e retina de cada animal para as provas de bioensaio e PCR. Pela prova de bioensaio foi isolado o parasita quatro dos animais inoculados, sendo dois na retina, um no coração e um na língua. O DNA de Toxoplasma gondii foi detectado em cinco dos suínos inoculados, sendo: em três dos animais na língua, em dois no cérebro e no coração e na retina de um dos animais. O limiar de detecção da nPCR foi de 10 taquizoítas/mL de suspensão de cérebro de camundongos artificialmente contaminada. Nenhuma das técnicas detectou o agente em todos os animais inoculados, entretanto a nPCR, apresentou maior capacidade de detecção e menor tempo para a obtenção do diagnóstico. A utilização das técnicas em associação foi capaz de detectar o agente em sete dos animais inoculados. A única forma de melhorar a sensibilidade do método seria aumentando a quantidade de tecido a ser examinado. | The aim of the present experiment was to standardize a nested polymerase chain reaction (nPCR) for the detection of Toxoplasma gondii in tissues of experimentally infected pigs and to compare the performance of nPCR with the standard isolation technique, the bioassay in mice. Comparison between the two methods was done testing eight 4 month-old pigs orally inoculated with 5 x 10(4) oocysts of Toxoplasma gondii (AS-28 strain) and three non-infected pigs at the same age, kept as control. All animals were euthanatized 47 days after infection and samples of brain, heart, tongue and retina were collected from each animal for analysis by nPCR and bioassay in mice. By using the bioassay, Toxoplasma gondii was detected in 4 infected pigs, being two in the retina, one in the heart and one in the tongue. Toxoplasma gondii DNA was detected in five of the inoculated pigs, being: three in the tongue, two in the brain and heart and one in retina. The detection threshold of the nPCR on mouse brain suspension artificially infected with the RH strain of Toxoplasma gondii was 10 tachyzoites/ml. Although both techniques were unable to detect the parasite in all infected pigs, nPCR showed better performance as it was accomplished in a shorter period of time. When used concurrently, both techniques detected the agent in seven infected animals. The only way to increase sensitivity of either method is to increase the amount of tissue to be examined.